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中国大陆H9N2亚型禽流感病毒遗传演化分析及疫苗株的选择

作　者: 万晓朋
导　师: 田国彬
学　校: 中国农业科学院
专　业: 预防兽医学
关键词: 禽流感 H9N2 遗传演化 疫苗种毒
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


H9N2亚型禽流感病毒在全世界范围均有分布,是危害养禽业的主要疾病之一。1994年,我国大陆首次从鸡体内分离出H9N2亚型禽流感病毒,此后,该亚型病毒开始在我国鸡群内蔓延,严重影响着我国养禽业的发展。而且,H9N2亚型禽流感病毒可以直接感染人类,具有重要的公共卫生意义。1996～2004年,我国大陆分离的H9N2亚型禽流感病毒以CK/BJ/1/94亚群为主。为了持续观察该亚型病毒的变异方向,本研究选取了2005～2009年我国大陆分离的51株病毒,进行了HA和NA基因的遗传演化分析。HA基因进化分析表明,51株病毒均属于CK/BJ/1/94亚群,但亚群内51株病毒明显分成4个分支,分支间同源率在93.9%以下;2008年和2009年分离的病毒基本上在同一分支上,具有更近的亲缘关系。NA基因中有35株病毒属于CK/BJ/1/94亚群,其余16株病毒均属于G9亚群。本研究表明,我国大陆流行的H9N2亚型禽流感病毒依然以CK/BJ/1/94亚群为主,但已发生明显的变异。研究还发现,在不同省份分离的H9N2亚型禽流感病毒具有很高的同源性,说明禽流感病毒会突破地域限制呈大范围流行,不同宿主分离的毒株具有很高的同源性,表明当H9N2亚型禽流感病毒进入某一地区后,常会引起该地区多种家禽感染,并且由于它的低致病性而使其更易长期在家禽间隐性感染和传播,增加了防控难度。对51株病毒HA和NA基因序列分析表明,HA基因裂解位点处的氨基酸序列为-R(K)S(A)SR/GL-,无多个碱性氨基酸插入,具有典型的低致病性禽流感病毒HA基因特征。HA基因的受体结合位点没有表现出很大的差异,特别是226位氨基酸,51株病毒中50株都是谷氨酰胺(Q),没有毒株呈现出典型的人流感受体结合特性;但51株病毒中有44株病毒在324位点上有一个潜在的糖基化位点,此位点在HA1和HA2裂解位点附近,此位点的糖基化可能影响到HA链的裂解,对病毒的特性产生影响。属于CK/BJ/1/94亚群的35株病毒与以前分离的病毒相比NA基因颈部均有9个核苷酸的缺失,而属于G9亚群的16株病毒的NA基因颈部未发生缺失。疫苗免疫在我国的禽流感的防控中发挥了重要作用。为筛选出具有良好免疫原性的H9N2亚型禽流感灭活流行株种毒,本研究选择了2008年中国大陆8个省份分离的15株H9N2亚型禽流感病毒进行抗原性分析,选取其中6株代表流行株进行鉴定并制备灭活疫苗,进行免疫效力评估。以106EID50剂量鼻腔感染途径攻毒后,6株病毒中只有CK/HuN/174/08和CK/HuN/33/08株灭活疫苗免疫鸡不仅可以对同源毒株的攻击提供良好的免疫保护,而且对08年异源毒株的攻击也能提供比较理想的免疫保护,可作为适合我国大部分地区应用的H9N2亚型禽流感灭活疫苗种毒株。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-10
第一章 引言  10-18
  1.1 禽流感概述  10
  1.2 禽流感病毒基因功能  10-12
    1.2.1 内部基因功能  10-11
    1.2.2 外部基因功能  11-12
  1.3 禽流感流行的历史及现状  12-14
    1.3.1 高致病性禽流感  12-13
    1.3.2 H9N2 亚型低致病性禽流感  13-14
  1.4 禽流感疫苗  14-16
    1.4.1 全病毒灭活疫苗  14-15
    1.4.2 重组活载体疫苗  15
    1.4.3 亚单位疫苗  15
    1.4.4 DNA 疫苗  15-16
    1.4.5 冷适应流感弱毒疫苗  16
    1.4.6 表位疫苗  16
  1.5 本研究的目的和意义  16-18
第二章 H9N2 亚型禽流感病毒遗传演化分析  18-48
  2.1 材料和方法  18-21
    2.1.1 材料  18-20
    2.1.2 方法  20-21
  2.2 结果  21-48
    2.2.1 HA 基因遗传分析  21-34
    2.2.2 NA 基因遗传分析  34-48
第三章 H9N2 亚型禽流感疫苗株的选择及攻毒方式研究  48-56
  3.1 材料与方法  48-50
    3.1.1 病毒和血清  48
    3.1.2 主要仪器及试剂  48
    3.1.3 SPF 鸡胚、SPF 鸡和非免疫鸡胚  48
    3.1.4 病毒的抗原性分析  48-49
    3.1.5 毒株的鸡胚半数感染量（EID_(50)）测定  49
    3.1.6 候选疫苗株对SPF 鸡的致病性  49
    3.1.7 毒株的稳定性检验  49
    3.1.8 灭活疫苗的制备  49
    3.1.9 候选株灭活疫苗免疫效力试验  49-50
    3.1.10 攻毒方式比较试验  50
  3.2 结果  50-54
    3.2.1 抗原性分析  50-51
    3.2.2 效检用毒株鸡胚半数感染量（EID50）测定  51
    3.2.3 候选疫苗株对SPF 鸡的致病性  51
    3.2.4 毒株的稳定性  51-52
    3.2.5 灭活苗免疫效果试验  52-54
    3.2.6 攻毒方式比较试验结果  54
  3.3 讨论  54-56
第四章 结论  56-57
参考文献  57-64
附录  64-87
致谢  87-88
作者简历  88

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 家畜病毒学
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