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FAT10调控MMP2对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响

作　者: 杨志强
导　师: 邵江华
学　校: 南昌大学医学院
专　业: 外科学
关键词: 原发性肝细胞癌 类泛素蛋白 Ⅳ型胶原酶 小干扰核糖核酸 侵袭和迁移
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的:应用RNA干扰技术抑制肝癌细胞株MHCC97H和Huh-7中FATl0基因的表达，探讨FATl0基因调节MMP2基因对人肝癌细胞株侵袭、迁移能力的影响，为进一步研究肝癌的侵袭和转移机制提供理论依据。方法:1、设计FAT10-siRNA干扰片段，将其转染到肝癌细胞株MHCC97H和Huh-7中，通过荧光定量PCR和Western blot检测FAT10mRNA和蛋白的表达变化情况。2、降低肝细胞癌MHCC97H和Huh-7细胞中FAT10的表达，运用荧光定量PCR和western blot检测MMP2mRNA和蛋白的表达变化。3、运用transwell侵袭、迁移实验和划痕实验，观察降低FAT10基因表达对肝癌细胞MHCC97H和Huh-7体外侵袭和迁移能力的影响。结果:1、将FAT10-siRNA转染至肝癌细胞MHCC97H和Huh-7细胞，荧光定量PCR和Western blot检测结果发现FAT10mRNA和蛋白明显下调。2、降低肝癌细胞FAT10基因表达，荧光定量PCR和Western blot检测结果发现MMP2mRNA和蛋白的表达也随之下调。3、Transwell侵袭、迁移实验和划痕实验发现降低FAT10基因表达，人肝癌细胞株MHCC97H和Huh-7体外侵袭和迁移能力明显下降。结论:降低MHCC97H和Huh-7细胞FAT10基因表达后，MMP2基因表达也随之下降，其体外侵袭、迁移能力也明显下降。FAT10可能通过调节MMP2而影响肝癌细胞侵袭和迁移。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-9
第1章 引言  9-11
第2章 材料  11-15
  2.1 细胞株  11
  2.2 主要试剂  11-12
  2.3 自配试剂  12-14
  2.4 主要仪器设备  14-15
第3章 方法  15-25
  3.1 细胞培养  15-16
    3.1.1 细胞传代  15
    3.1.2 细胞冻存  15
    3.1.3 细胞复苏  15-16
  3.2 siRNA 转染后信使 RNA 的检测  16-20
    3.2.1 设计 FAT10 基因干扰 siRNA 序列  16
    3.2.2 采用 SYBR-Green 荧光定量染料法分析 mRNA 的变化  16-20
  3.3 Western blot 试验检测肝癌细胞蛋白表达  20-22
    3.3.1 细胞转染  20
    3.3.2 细胞蛋白提取  20
    3.3.3 SDS－PAGE 电泳  20-21
    3.3.4 转膜  21-22
    3.3.5 免疫反应  22
    3.3.6 化学发光，显影，定影  22
    3.3.7 凝胶图象分析  22
  3.4 细胞侵袭、迁移试验（Transwell）  22-23
    3.4.1 细胞转染  22
    3.4.2 Transwell 侵袭小室测定细胞侵袭能力  22-23
    3.4.3 Transwell 侵袭小室测定细胞迁移能力  23
  3.5 细胞迁移试验(划痕试验)  23-24
  3.6 统计学分析  24-25
第4章 结果  25-32
  4.1 实时荧光定量 PCR 分析显示 FAT10 mRNA 表达  25
  4.2 Western blot 实验分析显示 FAT10 蛋白的表达  25-26
  4.3 实时荧光定量 PCR 分析显示 MMP2 mRNA 表达  26-27
  4.4 Western blot 实验分析显示 MMP2 蛋白的表达  27-28
  4.5 Transwell 体外侵袭实验检测肝癌细胞体外侵袭能力  28-29
  4.6 Transwell 体外迁移实验检测肝癌细胞体外其迁移能力明显降低  29-30
  4.7 细胞划痕试验分析肝癌细胞迁移能力  30-32
第5章 讨论  32-34
第6章 结论  34-35
致谢  35-36
参考文献  36-38
攻读学位期间的研究成果  38-39
综述  39-45
  参考文献  43-45

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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