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OLFM4 mRNA与核仁素蛋白的相互作用研究

作　者: 安娜
导　师: 刘先俊
学　校: 重庆医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 核仁素 OLFM4 RNA染色质免疫共沉淀（RNAChip）双荧光素酶报告基因试验 RNA稳定性
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：嗅觉介导素4(OLFM4)基因又称为GW112，hGC-1，在多种肿瘤中高表达，研究表明OLFM4在肿瘤发生发展中起重要作用，但结果并不一致，这显示OLFM4的作用存在细胞和组织特异性。本研究主要探讨OLFM4mRNA与核仁素（Nucleolin, C23或NCL）蛋白之间是否存在相互作用，以及核仁素对OLFM4转录水平的调控。方法：构建过表达核仁素质粒GC146-Ncl和阴性对照质粒GV-142以及敲低核仁素质粒pGenesil-1.1-Si和敲低阴性对照质粒pGenesil-1.1-HK，分别转染SGC-7901和293-T细胞，用western blot鉴定C23蛋白表达水平。将上述质粒分别与OLFM4-报告基因质粒共转染，分析核仁素对OLFM4活性的影响。收集SGC-7901细胞核染色质，孵育细胞核染色质和核仁素，进行蛋白质-RNA免疫共沉淀后，提取RNA，用RT-PCR检测与蛋白质结合的mRNA类型。结果：构建的过表达质粒GC146-Ncl和阴性对照质粒GV-142以及敲低（knock down）质粒pGenesil-1.1-Si和敲低阴性对照质粒pGenesil-1.1-HK，分别转染细胞，48h后荧光率达60%。western blot结果显示，核仁素过表达组中核仁素表达上调，核仁素敲低组中核仁素表达下调，分别与它们的阴性对照组相比。双荧光素酶报告基因实验结果显示，SGC-7901细胞中过表达质粒GC146-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的1.15倍（P<0.05），敲低质粒pGenesil-1.1-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的0.8倍（P<0.05）；293-T细胞中过表达质粒GC146-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的1.7倍（P<0.05），敲低质粒pGenesil-1.1-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的0.5倍（P<0.05）。确定了合适的超声波破碎条件：即输出功率40%，每次1s，间隔30s，共30次。蛋白质-RNA免疫共沉淀后RT-PCR结果显示，扩增出OLFM4基因490bp片段和Bcl-2基因153bp片段。结论：核仁素与OLFM4mRNA可以相互结合，且核仁素可以通过增加OLFM4转录水平和延长OLFM4mRNA的半衰期来增加OLFM4mRNA的稳定性。

全文目录

英文缩略语名词对照  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-12
前言  12-14
第一部分核仁素对 OLFM4 活性的影响  14-25
  1 材料与方法  14-21
  2 结果  21-23
  3 讨论  23-25
第二部分 OLFM4 与核仁素结合鉴定实验  25-31
  1 材料与方法  25-28
  2 结果  28-29
  3 讨论  29-31
全文总结  31-32
参考文献  32-36
文献综述：OLFM4 基因在肿瘤发生中的作用  36-45
  参考文献  42-45
致谢  45-46
攻读硕士期间发表的论文  46-47

OLFM4 mRNA与核仁素蛋白的相互作用研究

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