学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

β-Glucan Enhances Anti-Tumor Immune Responses by Regulating Suppressor and Effector Cells in Melanoma Mouse Model

作　者: Samuel Essien-Baidoo
导　师: 王胜军
学　校: 江苏大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: β-glucan GITRL MDSC Treg Th17 Dectin-1
分类号: R446.63
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
下　载: 14次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的：(1)利用β-葡聚糖刺激树突状细胞(Dendritic cells, DCs)表面Dectin-1(DC-associated C-type lectin)受体,观察DC细胞表面糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关配体(glucocorticoid-induced TNFR-related protein ligand, GITRL)的表达情况；研究β-葡聚糖处理过的DC刺激Th17细胞反映的情况；建立小鼠黑色素瘤模型,观察β-葡聚糖对肿瘤发生发展的影响,并研究体内β-葡聚糖对Th17反应的影响。(2)利用Curdlan刺激MDSC细胞,观察MDSC细胞的数量以及精氨酸酶的变化情况；建立小鼠黑色素瘤模型,观察Curdlan对肿瘤发生发展的影响以及对荷瘤小鼠体内MDSC浸润情况的影响。(3)利用无花果多糖(FCPS)刺激DC细胞,研究FCPS对DC细胞成熟度以及免疫刺激能力的影响,并寻求其作用的信号通路。方法：1.1利用流式细胞术(FCM)检测BMDC细胞表面dectin-1受体的表达；1.2利用β-葡聚糖刺激BMDC细胞,采用FCM检测细胞表面GITRL的表达情况;1.3体外将β-葡聚糖刺激后的BMDC与效应性T细胞(Teff)、调节性T细胞(Treg)或仅与效应性T细胞共培养,采用[3H]TdR掺入试验检测β-葡聚糖刺激后的DC对Treg的抑制功能和对效应性T细胞增殖的影响。1.4采用FCM检测GITRL对Th17比例、数目以及相关细胞因子和转录因子的表达情况；1.5建立小鼠小鼠黑色素瘤模型,通过观察经β-葡聚糖处理后肿瘤的发展进程,采用流式细胞术和qRT-PCR检测小鼠体内GITRL, Th17细胞以及相关细胞因子的变化情况。2.1体外采用Curdlan刺激MDSC细胞,利用FCM检测MDSC细胞的比例,并检测精氨酸酶的活性；2.2建立小鼠黑色素瘤模型,观察肿瘤的发展进程,并通过FCM检测荷瘤小鼠体内浸润的MDSC细胞的比例。3.1采用无花果多糖(FCPS)刺激BMDC细胞,通过Western-blot检测FCPS激活的下游信号分子；3.2FCPS刺激BMDC,检测BMDC细胞表面分子CD40, CD80, CD86, MHCII的表达以及相关炎症因子的表达情况；3.3体外将FCPS刺激后的BMDC与效应性T细胞(Teff),采用[3H]TdR掺入试验检测FCPS刺激后的DC对效应性T细胞增殖的影响,从而反映DC的免疫刺激能力。结果：1.1经FCM检测,BMDC细胞表面表达dectin-1受体；1.2FCM结果显示,p-葡聚糖能够上调BMDC细胞表面的GITRL的表达；1.3体外增殖试验及Treg免疫抑制功能试验表明,β-葡聚糖刺激DC后表面上调的mGITRL能够通过GITR/GITRL系统促进效应性T细胞增殖,损害Treg的抑制功能；1.4通过FCM, qRT-PCR以及ELISA结果显示GITRL能够增加Th17细胞的数量以及RORyt和IL-17的表达；1.5肿瘤模型结果显示,β-葡聚糖能够延缓肿瘤的发展进程,上调体内DC表面GITRL的表达,从而增强体内Th17细胞的反应。2.1FCM结果显示,Curdlan能够显著降低MDSC细胞的数量以及精氨酸酶的表达；2.2通过小鼠肿瘤模型,我们发现,p-葡聚糖能够延缓黑色素瘤的发展进程,并显著降低小鼠体内MDSC细胞的浸润。3.1通过Western-blot检测发现,FCPS能够通过dectin-1途经活化BMDC细胞内Syk分子；3.2FCM以及qRT-PCR结果显示,FCPS能够促进BMDC细胞的活化与成熟,促进DC细胞IL-12,IFN-y,IL-6以及IL-23的mRNA表达水平；3.3体外共培养实验结果表明,FCPS能够增强DC细胞的免疫刺激能力,促进效应性T细胞的增殖。结论：(1)体内和体外实验表明,β-葡聚糖能够通过dectin-1途经上调DC表面GITRL的表达,从而增强Th17细胞的免疫应答,进而延缓肿瘤的发生发展。(2)体内和体外实验表明,Curdlan能够下调MDSC细胞的数量以及精氨酸的表达,从而延缓肿瘤的发生发展。(3)体外实验表明,FCPS能够通过dectin-1/Syk途经促进DC细胞的活化与成熟,增强DC细胞的免疫刺激能力,从而促进T细胞的增殖。

全文目录


Abstract  8-12
摘要  12-15
List of Abbreviations  15-18
Table of Contents  18-22
List of Figures  22-23
Chapter 1  23-55
  1.1  23-28
    1.1.0 General Review (Background)  23
    1.1.1 β-Glucan Sources and Structure  23-26
    1.1.2 Particulate β-Glucans  26
    1.1.3 Soluble β-Glucans  26-27
    1.1.4 Active Moiety of β-Glucans  27
    1.1.5 Effects of β-Glucans on the Immune System  27-28
  1.2  28-32
    1.2.0 Dectin-1  28-32
  1.3  32-35
    1.3.0 GITR and GITRL  32-33
    1.3.1 The GITR/GITRL System in APCs  33-35
  1.4  35-40
    1.4.0 Th17  35-37
    1.4.1 Th17 and Cancer  37-38
    1.4.2 Th17 and Treg Cells  38-40
  1.5  40-48
    1.5.0 Myeloid-Derived Suppressor Cell Biology  40-41
    1.5.1 Murine and Humans MDSCs  41-42
    1.5.2 Murine MDSC in Tumors  42-43
    1.5.3 Human MDSCs  43-44
    1.5.4 MDSC Generation and Expansion  44-47
    1.5.6 Suppressive Activity of MDSC  47-48
    1.5.7 Myeloid-Derived Suppressor Cell Modulation  48
  1.6  48-51
    1.6.0 Melanoma  48-49
    1.6.1 Melanoma Microenvironment and MDSC Immunosuppressivity  49-50
    1.6.2 Neutralization of Immunosuppression in Melanoma  50-51
  1.7  51-55
    1.7.0 Statement of Problem Hypothesis and Experimental Design  51-53
    1.7.1 Specific Aims and Objectives  53-55
Chapter 2 Up-Regulation of GITRL on Bone Marrow-derived Dendritic Cells by β-Glucans Improves Anti-Tumor Immunity via Enhancing the Expansion of Th17 Cells in Melanoma  55-78
  2.1.0 Introduction  55-58
  2.1.1 Materials and Methods  58-65
    2.1.1.1 β-Glucan  58
    2.1.1.2 Bone Marrow-derived DC (BMDC)  58-59
    2.1.1.3 In vitro Proliferation Assays  59-60
    2.1.1.4 Cell line, Mice and Tumor Models  60
    2.1.1.5 Recombinant GITRL Protein  60-61
    2.1.1.6 Preparation of Single Cell Suspension from Tumors  61
    2.1.1.7 Cell Culture  61-62
    2.1.1.8 Flow Cytometry  62-63
    2.1.1.9 Quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR)  63-65
      2.1.1.9.1 Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA)  64
      2.1.1.9.2 Statistical analysis  64-65
  2.1.2 Results  65-74
    2.1.2.1 β-Glucan Induces the Up-Regulation of GITRL on BMDCs via Dectin-1  65-66
    2.1.2.2 Increased GITRL Expression on BMDCs by β-glucan Impairs Treg-mediated Suppressive Effect and Enhances Teff Proliferation  66-67
    2.1.2.3 Th17 Cell Generation is Enhanced in GITRL Treated Mice in vitro  67-68
    2.1.2.4 GITRL expression on BMDCs are markedly augmented and tumor progression is delayed after β-glucan treatment  68-69
    2.1.2.5 Augmented CD4+IL-17+Tcells Are Induced Following β-Glucan Treatment  69-72
    2.1.2.6 Expressions of Th17 Signature Molecules is Augmented after β-Glucan Treatment  72-74
  2.1.3 Discussion  74-78
Chapter 3 Curdlan Enhances Anti-Tumor Immune Responses by Regulating the Proportion and Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells in Melanoma  78-89
  3.1.0 Introduction  78-81
  3.1.1 Materials and Methods  81-83
    3.1.1.1 Preparation of β-Glucan (Curdlan)  81
    3.1.1.2 Cell Line, Mice and Tumor Models  81-82
    3.1.1.3 Preparation of Single Cell Suspensions  82
    3.1.1.4 Isolation of MDSCs  82
    3.1.1.5 Flow Cytometry  82
    3.1.1.6 Detection of Arginase Activity  82-83
    3.1.1.7 In vitro Proliferation Assays  83
    3.1.1.8 Data Analysis  83
  3.1.2 Results  83-86
    3.1.2.1 Curdlan Reduces The Number and arginase level of MDSCs In Vitro  83-85
    3.1.2.2 Curdlan Treatment Reduces MDSC Proportions and Delays Tumor Growth  85-86
  3.1.3 Discussion  86-89
Chapter 4 FCPS Up-Regulate Dectin-1 on Bone Marrow-derived Dendritic Cells via Syk and Enhances DC Maturation and Proliferation of Effector T cells  89-102
  4.1.0 Introduction  89-91
  4.1.1 Materials and Methods  91-94
    4.1.1.1 FCPS (Ficus carica polysaccharide)  91
    4.1.1.2 Bone Marrow-derived DC (BMDC)  91-92
    4.1.1.3 Cell Culture  92
    4.1.1.4 Western blot analysis  92
    4.1.1.5 Flow Cytometry  92-93
    4.1.1.6 Quantitative Real-Time PCR (qRT- PCR)  93-94
    4.1.1.7 Statistical analysis  94
  4.1.2 Results  94-100
    4.1.2.1 Dectin-1 expression on BMDC  94-95
    4.1.2.2 FCPS induces Syk activation to bind Dectin-1 in BMDCs  95-96
    4.1.2.3 FCPS Stimulation of BMDCs Enhances Increased Expressions of Inflammatory Factors  96
    4.1.2.4 FCPS promotes DC maturation via Dectin-1  96-99
    4.1.2.5 FCPS Stimulated BMDCs Show Increased T Effector Cell Proliferation  99-100
  4.1.3 Discussion  100-102
Chapter 5  102-108
  5.1.0 Main Conclusions  102-105
  5.1.1 Main Innovations  105
  5.1.2 Research Prospects  105-108
References  108-130
Publications  130-132
Acknowledgments  132

相似论文

  1. 类风湿关节炎患者TH17细胞及其相关细胞因子的表达及临床意义,R593.22
  2. Treg/Th17平衡在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究,R714.2
  3. 明胶海绵微粒化疗栓塞肝细胞癌术后调节性T细胞变化及其意义,R735.7
  4. 脓毒症肺损伤（ALI/ARDS）患者外周血免疫指标Th1、Th2、HLA-DR和Treg的变化及中西医结合治疗,R459.7
  5. 骨髓间充质干细胞在同种心脏移植中对Treg细胞作用的实验研究,R654.2
  6. CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞在衰老过程中的变化及与肺癌的关系探讨,R734.2
  7. NSCLC患者外周血及癌组织Th17细胞和IL-17水平及其临床意义,R734.2
  8. 老年非小细胞肺癌外周血Th17和Treg细胞的表达及与免疫衰老的相关性研究,R734.2
  9. 运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg表达的影响,G804.2
  10. 游泳运动对小鼠脾脏TLR2、TLR4诱导表达作用的实验研究,R87
  11. 儿童过敏性紫癜急性期Th17细胞功能与CD4~+CD25~+调节性T细胞水平变化,R725.5
  12. Dectin-1介导的人角膜上皮细胞对烟曲霉菌的固有免疫反应,R772.21
  13. 119例梅毒血清固定患者的临床分析及其外周血中髓系衍生抑制细胞（MDSC）的检测,R759.1
  14. Tim-3在外周血单个核细胞上的表达及其在类风湿关节炎高活动度患者中的病理意义,R593.22
  15. 外周血中NK和Treg细胞的数目和功能变化对供精人工授精不良结局的影响,R711.6
  16. 红麻素抗类风湿性关节炎作用及诱导免疫耐受机制研究,R965
  17. 雷公藤甲素对小鼠实验性结肠炎Thl7/Treg的调节作用,R285.5
  18. Fasudil对实验性免疫性肝炎肝组织Treg的影响,R575.1
  19. 阻断TNF-α受体信号能减少MDSC向肿瘤组织募集与迁移,R730.3
  20. 变应性鼻炎外周血Th17、CD4+IL-10+Treg、Th1/2细胞功能研究,R765.21
  21. 泰素对调节性和效应性T细胞的不同作用及其机制研究,R392

中图分类: > 医药、卫生 > 临床医学 > 诊断学 > 实验室诊断 > 免疫学检验 > 细胞免疫功能测定
© 2012 www.xueweilunwen.com