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基于药物相互作用的藜芦配伍丹参毒性研究

作　者: 李飞
导　师: 高月
学　校: 中南大学
专　业: 药学
关键词: 藜芦丹参急性毒性 CYP450酶药物相互作用
分类号: R289.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本研究以中药“十八反”中的藜芦与丹参为研究对象,一方面利用UPLC-Q-TOF MS深入分析了配伍化学成分改变,同时将这种化学成分变化与急性毒性变化进行关联,真正挖掘与毒性密切相关的贡献成分及其变化；另一方面研究藜芦与丹参配伍对CYP450亚酶活性影响以及藜芦生物碱经CYP450酶代谢的代谢规律,从体内、外两个层面阐释藜芦配伍丹参毒性变化的可能机制。结果显示固定藜芦剂量的不同配比毒性实验涵盖了1：1配伍与均匀设计两种设计,较为适合用来研究特定比例下藜芦配伍丹参的毒性变化规律。在固定藜芦剂量的七个不同配比毒性实验(1：10-10：1),配伍比例1：1是其毒性分界点。当藜芦配伍丹参比例大于1：1时,配伍毒性大于藜芦单煎液组,表现出增毒作用；当比例为1：2～1：10时,配伍并没有表现出毒性。物质基础分析显示,藜芦定、计默亭碱、伪介芬胺等生物碱溶出度变化与急毒实验规律相吻合,表明上述毒性生物碱可能是藜芦与丹参特定比例配伍后毒性增强主要化学标志物。揭示了少量丹参能够促使藜芦中生物碱等毒性物质的溶出释放,这可能是丹参与藜芦配伍禁忌的物质基础和机制乙一。藜芦、丹参单药以及两药配伍均表现出对CYP1A2、CYP2C9、 CYP2C19、CYP2B6较强的抑制作用。同时药代动力学参数显示丹参能够使藜芦胺、介芬胺、藜芦新碱、伪介芬胺在体内代谢减慢,ACU增加,在一定程度上会造成藜芦生物碱在体内蓄积,从而导致毒性增加。这是藜芦配伍丹参毒性增大的可能机制之一。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
英文缩略词表  10-12
1 绪论  12-16
2 藜芦、丹参单药以及配伍的急性毒性实验  16-24
  2.1 实验材料  16-17
    2.1.1 实验动物  16
    2.1.2 药材与试剂  16
    2.1.3 仪器  16-17
  2.2 实验方法  17-19
    2.2.1 中药水煎液的煎煮实验  17
    2.2.2 丹参浸膏毒性实验  17
    2.2.3 丹参MTD实验  17
    2.2.4 藜芦与丹参1：1配伍毒性实验  17
    2.2.5 藜芦与丹参配伍均匀设计毒性实验  17-18
    2.2.6 固定藜芦剂量的不同配比毒性实验  18-19
  2.3 实验结果  19-21
    2.3.1 丹参浸膏灌胃实验结果  19
    2.3.2 丹参MTD实验结果  19
    2.3.3 藜芦与丹参1：1配伍毒性实验结果  19-20
    2.3.4 藜芦与丹参配伍均匀设计实验结果  20
    2.3.5 固定藜芦剂量的藜芦与丹参不同配比毒性实验结果  20-21
  2.4 小结与讨论  21-24
3 固定藜芦剂量的藜芦与丹参不同比例配伍物质基础实验  24-36
  3.1 实验材  24-25
    3.1.1 药材与试剂  24
    3.1.2 仪器  24-25
  3.2 实验方法  25-26
    3.2.1 供试样品的制备  25
    3.2.2 液相色谱条件  25
    3.2.3 质谱条件  25-26
    3.2.4 数据分析  26
  3.3 实验结果  26-33
    3.3.1 藜芦与丹参不同比例配伍组样品的总离子流图  26-27
    3.3.2 藜芦与丹参不同比例配伍组中藜芦生物碱的成分的确证  27-29
    3.3.3 藜芦生物碱含量在各组间变化趋势  29-33
  3.4 小结与讨论  33-36
4 基于“Cocktail”探针法体外研究藜芦配伍丹参对CYP450酶活性影响  36-58
  4.1 实验材料  36-37
    4.1.1 实验动物  36
    3.1.2 药材与试剂  36-37
    4.1.3 仪器  37
  4.2 实验方法  37-44
    4.2.1 供试样品的制备  37-38
    4.2.2 溶液的配制  38-39
    4.2.3 动物分组及给药  39
    4.2.4 肝微粒体的制备  39
    4.2.5 肝微粒体蛋白含量的测定  39-40
    4.2.6 “Cocktail“探针药物法大鼠肝微粒体体外孵育实验  40-43
    4.2.7 CYP450亚酶活性的检测  43-44
    4.2.8 数据分析与统计处理  44
  4.3 实验结果  44-55
    4.3.1 肝微粒体蛋白含量测定结果  44-45
    4.3.2 代谢产物的标准曲线  45-47
    4.3.3 CYP450酶活性测定结果  47-55
  4.4 小结与讨论  55-58
5 基于UPLC-Q-TOF MS研究丹参对藜芦生物碱代谢的影响  58-72
  5.1 实验材料  58-59
    5.1.1 实验动物  58
    5.1.2 药材与试剂  58
    5.1.3 仪器  58-59
  5.2 实验方法  59-61
    5.2.1 供试样品的制备  59
    5.2.2 溶液的配制  59
    5.2.3 动物分组及给药  59-60
    5.2.4 血浆样品的采集、处理  60
    5.2.5 标准曲线的制备  60
    5.2.6 分析条件  60-61
    5.2.7 数据处理  61
  5.3 实验结果  61-70
    5.3.1 介芬胺与藜芦胺标准曲线  61-62
    5.3.2 空白血浆及给药血浆样品离子流图分析  62-65
    5.3.3 四种藜芦生物碱药代动力学结果分析  65-70
  5.4 小结与讨论  70-72
全文总结  72-76
参考文献  76-82
硕士期间研究成果  82-84
致谢  84-86
综述  86-95
  参考文献  94-95

基于药物相互作用的藜芦配伍丹参毒性研究

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