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加味青蒿鳖甲汤对髓系MRD-L患者CD34~+细胞源DC影响的研究

作　者: 宋益青
导　师: 黄礼明
学　校: 贵阳中医学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 加味青蒿鳖甲汤髓系MRD-L CD34~+细胞 DC
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的本研究从树突细胞抗原提呈能力切入,将急性髓系白血病达到血液学完全缓解的患者骨髓CD34+细胞分选扩增,用加味青蒿鳖甲汤联合组合细胞因子体外培养,定向分化为树突细胞(dendritic cells, DC),观察扶正透毒祛毒复方对DC成熟的影响。用上述诱导生成的DC与激发正常人和患者自体外周血T细胞,将激发后的T细胞与人红白血病细胞株(K562)以不同效靶比共同孵育,测定T细胞的特异性杀伤作用,探求扶正透毒祛毒复方治疗MRD-L的作用机制。方法1.将达到血液学完全缓解的急性髓系白血病患者的骨髓经Ficoll密度梯度离心法收获骨髓单个核细胞(BMNC),用免疫磁珠阳性选择法分选CD34+细胞,利用SCF、TPO、FL、IL-3细胞因子进行扩增,以不同浓度中药复方含药血清与组合细胞因子(GM-CSF、IL-4、IFN-α、TNF-α)、细胞因子、空白血清分别培养；在此过程中观察细胞变化。2.9天后收集培养的DC,流式细胞仪检测不同组别DCs表面标志CD80、CD86、CD83、CD1a、HLA-DR分子的表达。3.收集磁珠纯化的健康人及患者自体T细胞,与CD34+细胞来源的DC以10：1比例加入24孔培养板培养5d,培养基中加入IL-2。4.将激发后的T细胞与K562细胞分别以不同效靶比(10：1、20：1、40：1)培养24h,MTT法检测各组别DC激发T细胞的特异杀伤效应。结果1.各含药血清组、正常血清组联合细胞因子及单纯细胞因子组均能诱导出形态典型的DC,倒置显微镜下观察形态无明显差异,空白对照组未见典型DC形成。2.中药联合细胞因子组、细胞因子组抗原表达均高于空白对照组(P<0.01),中、低剂量组CD1a表达高于高剂量组及细胞因子组,之间的差异有显著统计学意义(P<0.05),高、中、低含药血清组HLA-DR表达与单纯细胞因子组及正常血清组之间有统计学差异,CD80、CD83、CD86表达各含药血清组及细胞因子组之间无明显差异。3.激发健康人外周血T细胞杀伤作用：效靶比10：1时,各组与空白组比较均有显著差异(P<0.01),中剂量组对K562细胞杀伤率较其他组别高(p<0.05),细胞因子组杀伤率最低,高、低剂量组与细胞因子组及正常血清组之间无明显差异；效靶比20：1时,中剂量组杀伤率最高,且较其余各组差异有统计意义(P<0.05),各组与空白组比较有显著差异(P<0.01),含药血清组、正常血清组与细胞因子组比较有差异(P<0.05)；效靶比40：1时,高剂量组、中剂量组、正常血清组与空白组、因子组比较有统计学差异(P<0.05),低剂量组与细胞因子组比较无统计学差异。4.激发AML-CR患者外周血T细胞杀伤作用：效靶比10：1时,各组较空白组均有统计学差异(P<0.01),中、低剂量组较细胞因子组、正常血清组比较有统计学意义(P<0.05),高剂量组杀伤率与细胞因子组比较无意义；效靶比20：1时,低剂量组杀伤率最高,但各组间比较无统计学意义,各组与空白组比较有统计学差异(P<0.01),效靶比40：1时,各含药血清组杀伤率均高于细胞因子组,差异有显著统计学意义(P<0.01),其中又以中剂量组杀伤率最高,各含药血清组之间无明显差异。结论1.经加味青蒿鳖甲汤含药血清与细胞因子共同培养的AML-CR患者CD34+细胞源DC具备典型特征和细胞表型,加味青蒿鳖甲汤含药血清联合细胞因子有助于AML-CR患者骨髓CD34+细胞源DC的成熟。2.加味青蒿鳖甲汤含药血清联合细胞因子诱导的DC激活的T淋巴细胞能够特异性杀伤K562细胞。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-10
前言  10-11
第一部分文献研究  11-16
第二部分实验研究  16-24
讨论与结论  24-28
总结与展望  28-29
参考文献  29-32
附录一缩略词  32-33
附录二综述  33-38
  参考文献  35-38
致谢  38-39
个人简历  39

加味青蒿鳖甲汤对髓系MRD-L患者CD34~+细胞源DC影响的研究

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