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加味青蒿鳖甲汤对髓系MRD-L患者CD34~+细胞源DC诱导过程中IL-12的影响

作　者: 刘健
导　师: 黄礼明
学　校: 贵阳中医学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 加味青蒿鳖甲汤 MRD-L CD34~+ DC IL-12
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：微小残留白血病是急性白血病缓解后复发的根源,其机制是机体的肿瘤免疫效应不能正常发挥效应,从而导致机体不能对残留白血病细胞进行有效的清除。树突细胞(DC)是已知抗原提呈能力最强的抗原提呈细胞,树突细胞的数量及抗原提呈能力,是急性白血病缓解后能否启动有效的肿瘤免疫应答的关键,树突状细胞的数量及成熟状态受诸多因素的影响,如何提高成熟树突状细胞的数量和质量,成为目前研究的热点。本研究采用体外培养的方法,用含不同剂量加味青蒿鳖甲汤动物血清及细胞因子,共同培养缓解期急性髓系白血病(AML-CR)患者骨髓中分离提取的CD34+细胞,诱导其成为树突状细胞,观察不同浓度的含药血清在不同阶段对树突细胞成熟的影响,以及在不同阶段各组血清中IL-12的分泌变化。间接免疫治疗微小残留白血病,探讨加味青蒿鳖甲汤能否诱导树突细胞更加成熟和对IL-12分泌的的影响,及IL-12与树突细胞之间的关系。方法：无菌抽取AML-CR的骨髓30ml,经Ficoll密度梯度离心法获得骨髓单个核细胞,再采用免疫磁珠阳性选择法提取纯度较高的CD34+细胞。将CD34+细胞用细胞因子(SCF、TPO、FLT-3)进行体外扩增,扩增6-9天后达到一定的细胞数量用6孔培养板分5组进行培养。5组中均用含10%FCS的RPMI1640作为基底液,用不同浓度的中药及细胞因子(GM-CSF、IL-4、IFN-α、TNF-α)分为高、中、低中药浓度组(含不同浓度中药的动物血清及细胞因子),空白血清组(含正常喂养的动物血清及细胞因子),细胞因子组(不添加动物血清,只有细胞因子)。在相同的环境下培养约9天,2～3天换液,密切观察细胞的生长及形态,同时在培养过程中的第0、6、9抽取上清液用ELISA法检测各组血清中IL-12的含量,细胞成熟后用流式细胞仪检测细胞表面免疫分子CD80、CD83、CD86、HLA-DR、CD1a的表达。结果：1.DC的形态：倒置显微镜下观察,第0天刚分装的CD34+细胞大而圆,悬浮于细胞培养液中;第3天细胞形成散在的小集落半悬浮在培养液中,体积变大,形状开始不规则；第6天细胞集落增多增大,细胞形态不规则,一部分细胞呈短刺突状；第7天细胞体体积进一步增大,呈树枝样短突,并且数量增多；第9天典型的树突细胞形态形成,胞体外周树突变长,数量增多。含不同剂量中药血清联合细胞因子组在诱导树突细胞形态上比细胞因子组及空白血清组要典型,突起明显较多,形态更为典型；各中药组之间在形态上无明显差别；在树突细胞的数量上,含中剂量中药血清组的树突细胞在数量上稍高于其他组。2.检测IL-12的含量变化：不同浓度中药血清组、空白血清组第9天含量比第0天明显增高,而细胞因子组则无明显差别。同一时间,含不同浓度中药血清组均高于细胞因子组及空白血清组,含中剂量中药血清组高于其他两组。3.各组均能表达树突细胞免疫表型,含不同浓度中药血清组与空白血清组比较表达CD80、CD83、CD86无明显统计学意义,含中、低浓度中药血清组表达CDla较其他组差异有统计学意义,不同浓度中药血清组表达HLA-DR较细胞因子组与空白血清组有统计学意义。结论：联合细胞因子GM-CSF、IL-4、IFN-α、TNF-α的含加味青蒿鳖甲汤不同浓度的血清,可使来源AML-CR骨髓的CD34+,在体外比单纯用细胞因子诱导培养树突细胞能够更好的促进DC的生长、成熟和分化,可能是加味青蒿鳖甲汤能影响树突细胞生长成熟的环境,如影响某些因子的含量,从而促进DC的成熟,并能促进树突细胞分泌IL-12,增加抗肿瘤作用。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-10
文献研究  10-16
实验部分  16-28
  1 实验材料与方法  16-19
  2 结果  19-25
  3 讨论  25-28
总结与展望  28-29
参考文献  29-32
附录一中英文缩略词对照  32-33
附录二综述  33-38
  参考文献  35-38
附录三致谢  38-39
附录四个人简介  39

加味青蒿鳖甲汤对髓系MRD-L患者CD34~+细胞源DC诱导过程中IL-12的影响

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