学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
预知子提取物对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响
作 者: 薛天
导 师: 杨雪梅
学 校: 南方医科大学
专 业: 药物化学
关键词: HPLC-ECD 预知子提取物 常春藤皂苷元 单胺类神经递质 马兜铃酸A
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 70次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
目的建立准确、灵敏、操作简便的高效液相色谱—电化学检测法(HPLC-ECD),测定大鼠脑组织中单胺类神经递质含量;考察预知子提取物(FAE)对大鼠前额皮层、海马、纹状体中去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)含量的影响,探索FAE可能的抗抑郁机制。建立检测马兜铃酸A的高效液相色谱法(HPLC-DAD),检测FAE与常春藤皂苷元(Hederagenin)中,是否含有肾毒性残留成分马兜铃酸A,进一步完善质量控制标准,以确保FAE和常春藤皂苷元的用药安全性。方法1、大鼠脑组织中单胺类神经递质测定方法的建立:采用HPLC-ECD法测定大鼠脑组织中NA、DA、5-HT的递质含量,以3,4-二羟基苄胺(DHBA)为内标。采用的色谱条件为,色谱柱:Dikma Diamonsil-C18(5μm,4.6×250mm);流动相:A-B(90:10),A为磷酸二氢钠水溶液(含25.0mmol/L NaH2PO4,1.7mmol/L辛烷磺酸钠,0.7mmol/L三乙胺,0.025mmol/LEDTA-2Na,pH=3.0),B为乙腈;流速:1.0mL/min;柱温:32℃;检测电势:E1=-150V,E2=220V,进样量20μL。2、FAE对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响:(1)急性给药实验:将体重范围在200-220g的雄性SD大鼠,随机分为4组,即溶剂对照(0.5%羧甲基纤维素钠)组、草酸-S-西酞普兰(ESC)10mg/kg阳性对照组、FAE50mg/kg给药组和FAE25mg/kg给药组。各组动物均灌胃-次,灌胃体积为10mL/kg;大鼠单次给药后分别于1h、2h、3h、5h四个时间点取出脑组织,冰上操作分离不同脑区,收集样品待测。(2)亚急性给药实验:将体重范围在200-220g的雄性SD大鼠,随机分为4组(同急性给药实验),除溶剂对照组灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠外,其余各组灌胃给予相应药物处理;各组动物每日灌胃1次,每次灌胃体积为10mL/kg,连续给药21d,并于末次给药2h后收集样品。(3)样品处理:大鼠断头处死,迅速取出全脑,于冰上快速分离出前额皮层、海马、纹状体部位,置冻存管存于液氮。取冻存的脑组织,称重后置于玻璃匀浆器,按10mL/kg的比例加入预冷含内标DHBA的高氯酸工作液,于冰浴下快速匀浆2min。将研磨好的匀浆液移入棕色离心管,于4℃条件下14000×g离心20min后取上清液,上清液再用0.22μm滤器过滤后上机检测。(4)数据处理:各部位的单胺类神经递质含量,均换算成湿组织浓度(ng/g),并用SPSS13.0进行统计学分析(ONE-WAY ANOVA),结果用GraphPad Prism5作图。3、马兜铃酸A检测方法的建立:采用HPLC-DAD法,样品用Dikma Diamonsil-C18柱(5μm,4.6×250mm)进行分离;以乙腈-水-冰醋酸(80:20:0.04)作为流动相;流速1.0mL/min,柱温为32℃,进样量为20μL;检测波长分别为210nm与250nm。结果1、测定大鼠脑组织中单胺类神经递质的HPLC-ECD法:样品中的内源性物质不干扰检测,各色谱峰均有效分离。NA、DA、5-HT的定量下限依次为12.0ng/mL、9.8ng/mL、20.8ng/mL,分别在0.0240-0.2400,0.0196-0.1960,0.0226-0.2260μg/mL范围内线性关系良好(R2≥0.9996);平均回收率分别为NA:84.41%-102.77%,DA:87.52%~104.61%,5-HT:83.74%-101.66%,RSD均小于15%;日内精密度均在3.05%-5.81%范围内,日间精密度在4.98%~7.59%之间。2、急性给药处理后,大鼠脑组织各部位的单胺类神经递质变化结果:(1)在前额皮层与海马部位,与溶剂对照组比较,NA在急性给予25mg/klg和50mg/kg FAE3h后显著升高;5-HT在急性给予10mg/kg ESC2h后和给予50mg/kg FAE3h后有所升高;DA在给予各种处理后均末观察到明显的变化。(NA-溶剂对照组vs25mg/kg和50mg/kg FAE组,前额皮层:360.645±13.619ng/g vs436.582±5.785ng/g,450.396±12.506ng/g;海马:351.405±14.206ng/g vs394.362±±8.041ng/g,410.530±10.477ng/g。)(5-HT-溶剂对照组vs10mg/kg ESC组,前额皮层:934.494±25.054ng/g vs1034.001±29.773ng/g;海马:592.150±11.557ng/g vs645.036±12.545ng/g。溶剂对照组vs50mg/kg FAE组,前额皮层:939.202±27.075ng/g vs1024.500±39.169ng/g;海马:593.729±22.887ng/g vs645.012±±3.969ng/g。)(2)在纹状体部位,与溶剂对照组比较,DA在给予25mg/kg和50mg/kg FAE3h后升高,而NA和5-HT则在给予各种处理后均末观察到明显变化。(DA-溶剂对照组vs25mg/kg和50mg/kg FAE组,7316.341±463.518ng/gvs9057.434±604.403ng/g,9205.288±832.326ng/g。)3、亚急性给药处理后,大鼠脑组织各部位的单胺类神经递质变化结果:(1)在前额皮层与海马部位,与溶剂对照组比较,NA在连续给予25mg/kg和50mg/kg FAE21d后显著升高;5-HT在连续给予10mg/kg ESC、25mg/kg和50mg/kg FAE21d后显著升高;但DA在连续给予各种处理21d后末观察到明显变化。(NA-溶剂对照组vs25mg/kg和50mg/kg FAE组,前额皮层:302.295±±7.036ng/g vs351.930±3.271ng/g,382.463±7.208ng/g;海马:279.287±±4.142ng/g vs302.511±6.426ng/g,394.189±4.307ng/g。)(5-HT-溶剂对照组vs10mg/kg ESC组,25mg/kg和50mg/kg FAE组,前额皮层:826.005±±9.528ng/g vs1128.418±±17.316ng/g,1022.831±19.777ng/g,1012.098±±15.274ng/g;海马:549.010±2.723ng/g vs780.082±±4.558ng/g,703.941±3.976ng/g,758.575±±2.915ng/g。)(2)在纹状体部位,与溶剂对照组比较,DA在连续给予25mg/kg和50mg/kg FAE21d后显著升高。(DA-溶剂对照组vs25mg/kg和50mg/kg FAE组,7029.182±492.037ng/g vs9500.078±424.739ng/g,9706.304±366.826ng/g。)4、测定马兜铃酸A的HPLC-DAD法:马兜铃酸A和药用主成分常春藤皂苷元能有效分离;且在0.24~2.40μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.9993),检出限为40ng/mL;方法学考察结果显示,马兜铃酸A的日内精密度为1.24%~5.28%,日间精密度在4.11%~7.28%之间,平均回收率85.96%~96.23%,RSD≤2.96%。采用该检测方法,对本实验中的常春藤皂苷元样品和FAE进行检测,结果均末检出马兜铃酸A。结论建立的大鼠脑组织中单胺类神经递质HPLC-ECD检测方法,具有准确、灵敏、操作简便等特点,经方法学考察,适用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的定量检测。FAE能显著提高前额皮层、海马、纹状体部位的单胺类神经递质NA、DA、5-HT的含量,提示FAE的抗抑郁作用与单胺类神经递质含量水平的变化密切相关。建立马兜铃酸A的HPLC-DAD检测方法,具有快速、简单的特点,可用于马兜铃酸A的检测;所检测的样品中均末检测出马兜铃酸A,表明该实验所采用的FAE与常春藤皂苷元安全可靠。
|
全文目录
摘要 3-7 ABSTRACT 7-14 前言 14-20 第一章 FAE对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响 20-53 1 材料 20-21 2 试验方法 21-22 2.1 色谱条件 21 2.2 给药方法 21-22 2.3 样品的制备 22 2.4 统计学处理 22 3 结果 22-48 3.1 专属性实验 22-24 3.2 定量下限测定 24 3.3 标准曲线的制备 24-26 3.4 精密度试验 26-27 3.5 加样回收率实验 27 3.6 稳定性试验 27-29 3.7 样品测定 29-48 4 讨论 48-53 4.1 内标的选择 49 4.2 前处理方法的选择 49 4.3 色谱条件的选择 49-50 4.4 FAE对大鼠单胺类神经递质的影响 50-53 第二章 FAE与常春藤皂苷元中马兜铃酸A的检测 53-61 1 仪器与试药 53-54 2 实验方法 54 2.1 马兜铃酸A测定条件 54 2.2 溶液配制 54 3 结果 54-59 3.1 专属性实验 54-57 3.2 标准曲线的绘制 57-58 3.3 精密度试验 58 3.4 稳定性试验 58 3.5 重复性与回收率试验 58-59 3.6 检测灵敏度 59 3.7 样品检测 59 4 讨论 59-61 结论 61-63 参考文献 63-69 综述 69-78 参考文献 74-78 中英文缩略词表 78-79 攻读学位期间论文 79-80 致谢 80-81
|
相似论文
- 益气补肾中药(脑神康)对糖尿病及其脑缺血大鼠脑内单胺类神经递质含量的影响,R285.5
- 脑血通鼻腔喷雾乳剂抗脑缺血的作用研究,R285.5
- 糕点中合成色素、苹果汁中有机酸和中成药中马兜铃酸A的HPLC(MS)检测方法研究,R155.5
- 机械推拿对慢性疲劳综合征脾虚型大鼠行为学和脑内单胺类神经递质含量的影响,R244.1
- 乌腺金丝桃对慢性应激抑郁大鼠的作用及机理研究,R285
- 高山红景天总苷对运动性疲劳大鼠中枢系统单胺类神经递质影响的研究,R285
- 辽细辛药材的质量标准研究,R282
- 芍药甘草汤治疗脑卒中后痉挛的部分作用机理研究,R277.7
- 小建中颗粒的抗抑郁作用研究,R285
- 预知子提取物的制备及其抗抑郁药效学研究,R284
- HPLC对细辛含药血清中甲基丁香酚和马兜铃酸A含量的测定,R285.5
- 多环芳烃类对人群学习记忆的影响及机制研究,R131
- 蜂蜜中多酚类化合物的测定及指纹图谱的研究,R284
- 续断皂苷元的制备工艺、质量标准及其作为α-糖苷酶抑制剂的活性研究,R285
- 微波辅助萃取技术在中药质量控制中的研究与应用,R284.1
- 清脑胶囊治疗血管性痴呆的机制研究,R285.5
- HPLC-ECD色谱法测定青蒿素的研究与应用,R284.1
- 复方蛇胆川贝散中马兜铃酸A的限量检查及马兜铃的减毒研究,TQ461
- 玉郎伞多糖抗抑郁作用及机制的研究,R29
- 马兜铃酸致血管内皮细胞损伤机制探讨及羟苯磺酸钙的拮抗作用,R692.9
- 细辛中马兜铃酸的炮制脱毒研究,R283
中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
© 2012 www.xueweilunwen.com
|