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向日葵SSR分子标记遗传连锁图谱的构建

作 者: 房冬梅
导 师: 侯建华
学 校: 内蒙古农业大学
专 业: 作物遗传育种
关键词: 向日葵 SSR分子标记 遗传连锁图谱
分类号: S565.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 7次
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内容摘要


油用向日葵是世界五大油料作物之一,耐盐碱、耐旱、耐瘠、适应性广,主要分布在我国的内蒙、新疆、黑龙江等西北、华北、东北的半干旱、干旱地区。在这些地区,由于降雨量不足或分布不均,或没有灌溉条件,使得向日葵生产常常遭受干旱胁迫,所以抗旱节水是保证向日葵高产稳产的重要措施、也是向日葵遗传改良的主要育种目标。但由于作物抗旱性状属复杂的数量性状,基于基因定位基础上的分子育种就成为抗旱性遗传改良的一条高效育种方法。向日葵分子标记遗传连锁图谱的构建,是基因定位的基础,对向日葵抗旱相关性状的基因定位、图位克隆及分子育种具有重要意义。本文以抗旱性差异显著的两个自选系K55、K58为亲本材料,获得重组自交F4株系,选用SSR分子标记初步构建一张油用向日葵的分子遗传图谱。主要研究结果如下:(1)建立了一份RIL群体的材料,将抗旱性差异显著的两个自选系K55、K58(K55为弱抗性自交系、K58为强抗性自交系)杂交获得F1代,然后通过单粒传的方式连续自交获得F4代,F4代群体共194个株系。(2)建立了稳定的SSR反应体系,对其主要因素Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶量、引物浓度、退火温度等进行优化,最后获得适合油葵的反应体系。各因素的终浓度为Mg2+浓度2.5mM、dNTPs浓度0.2mM、Taq酶量0.5U、引物浓度0.4μM及退火温度54℃。(3)从500对向日葵SSR引物中筛选出150对亲本间具有多态性的引物,有85对差异显著的多态性引物在群体扩增中得到预期的结果。统计多态性产物共有227条,共分离分析后获得111个标记位点来完成图谱的构建工作。(4)经χ2检验分析有20个标记发生了偏分离,偏分离比率为18.02%。其中偏向亲本K55有5个标记,偏向杂合基因型的标记有5个,而偏向K58的标记有10个占所有偏分离比例的50%。(5)选用JoinMap4.0进行图谱的构建工作j图谱共构建出17个连锁群组,包含78个SSR标记。覆盖整个基因组长度为680.4cM,最大图距为52.2cM,最小图距为2.3cM,平均图距为8.72cM。图谱中第3条连锁群存在1个偏分离热点区域,且该偏离区域中的所有标记位点偏分离方向偏向K58。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-6
目录  6-8
缩略语表  8-9
1 引言  9-23
  1.1 作物育种技术的发展与遗传图谱研究  9-11
    1.1.1 国内外作物育种技术发展过程  9
    1.1.2 生物技术应用于作物育种  9-10
    1.1.3 作物遗传连锁图谱的研究  10-11
  1.2 遗传图谱的构建  11-14
    1.2.1 遗传作图的原理  11
    1.2.2 作图群体  11-13
    1.2.3 作图群体的大小  13-14
  1.3 作图中的遗传标记  14-19
    1.3.1 形态学标记  14
    1.3.2 细胞学标记  14
    1.3.3 生物化学标记  14-15
    1.3.4 分子标记  15-19
  1.4 构建遗传图谱的方法及软件  19-21
    1.4.1 位点分群  20
    1.4.2 位点排序  20
    1.4.3 距离估算  20-21
    1.4.4 作图软件  21
  1.5 作物遗传图谱的应用研究  21-22
    1.5.1 遗传连锁图谱在数量性状位点(QTL)定位的研究  21-22
    1.5.2 分子标记辅助育种  22
  1.6 本研究的目的和意义  22
  1.7 本研究的技术路线  22-23
2 材料与方法  23-27
  2.1 试验材料  23
  2.2 试验方法  23-27
    2.2.1 基因组DNA的提取  23
    2.2.2 DNA的检测  23-24
    2.2.3 SSR反应体系的建立  24-25
    2.2.4 引物的筛选  25-26
    2.2.5 群体的检测和数据记录  26
    2.2.6 连锁分析及作图  26-27
3 结果与分析  27-38
  3.1 基因组DNA提取  27
  3.2 油葵SSR反应体系的优化  27-29
    3.2.1 不同Mg~(2+)浓度对SSR-PCR反应的影响  27
    3.2.2 不同dNTPS浓度对SSR-PCR反应的影响  27
    3.2.3 不同引物浓度对SSR-PCR反应的影响  27-28
    3.2.4 不同酶量对SSR-PCR反应的影响  28
    3.2.5 不同退火温度对SSR-PCR反应的影响  28-29
  3.3 油葵SSR引物筛选  29
  3.4 F_4群体SSR标记分离分析  29-33
  3.5 油葵SSR分子图谱的构建  33-38
4 讨论  38-43
  4.1 DNA的提取  38
  4.2 SSR标记  38-39
  4.3 油葵SSR反应体系的确定  39-40
  4.4 连锁中共分离现象分析  40-41
  4.5 偏分离分析  41-42
  4.6 遗传图谱构建  42-43
5 结论  43-44
致谢  44-45
参考文献  45-51
作者简介  51

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 油料作物 > 向日葵
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