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桉树青枯病的快速检测及生物防控技术研究

作　者: 王艳
导　师: 谢耀坚
学　校: 中国林业科学研究院
专　业: 森林保护学
关键词: 桉树青枯病快速检测多粘类芽孢杆菌生物防治
分类号: S763.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

桉树（Eucalyptus）青枯病（Ralstonia solanacearum）是我国桉树人工林生产的重要病害。广东、广西及海南三省是我国桉树人工商品林主产区，种植面积达280万hm2，占我国桉树人工林总面积的76%，随着桉树人工林的不断增加，青枯病的发生日趋严重，已成为当前发展桉树生产的主要障碍之一。因此，通过对我国桉树人工林主产区发病桉树无性系的研究，以期为生产提供有理论依据的快速鉴定方法，有效地控制病原菌的进一步传播。本研究对11株病原菌形态学及分子生物学特征、桉树组培苗潜伏期及轻基质中青枯菌的PCR快速检测、以及抗青枯桉树无性系的测定及多粘类芽孢杆菌生防效果研究等几个方面进行了研究，为桉树青枯病早期的快速检测和后期防治提供一定的理论指导和技术支持。主要研究结果如下：（1）本研究采集了我国华南沿海三省桉树主产区共11株病原菌，系统的鉴定了其细菌学特征、生物型、形态特征及分子生物学特征。研究结果表明，桉树青枯病是由Ralstoniasolanacearum病原菌引起，分离获得的病菌进行致病性的初步测试，接种桉树组培苗后，能观察到与林间自然发病症状一致。不同菌株间致病性差异显著（P<0.01和P<0.05），采用K-均值聚类分析法（K=3），以发病高峰期、高峰期发病率和平均发病率为变量，结果表明HY01、HY02、DA01、HP04和HP05聚为一类，DA02和DA03聚为另一类，其余为第三类。四个不同采样点的发病率方差分析结果表明，广东阳江来源菌株与其他三个来源地间致病性差异显著（P <0.01）。（2）本研究采用以苯酚红为指示剂的方法，研究结果表明其中10株属于生物型3，另一株HP03无法归类到相应的生物型。根据Seal等以16S rRNA为靶基因的青枯菌特异性引物序列OLI1/Y2，能在4h小时内准确快速的扩增出单一的特异性条带，为检测及进一步研究有效控制病原菌的携带和传播提供了理论依据。（3）为了实现桉树组培苗和轻基质带菌情况的早期快速检测，将不同浓度青枯菌悬液人工接种于桉树组培苗和轻基质中，利用特异性寡核苷酸引物OLI1/Y2，能快速的检测出潜伏期组培苗，以及带菌轻基质中青枯菌的数量。检测结果表明：试剂盒法提取基因组DNA纯度较高，A260/280均在1.7-1.9之间。桉树组培苗组织和轻基质中检测限分别为10²cfu mL^-1和103cfu mL^-1。因此，潜伏期PCR快速检测法为预防病原菌的进一步传播提供了新的思路。（4）采用伤根法对3种常用桉树无性系组培苗进行初步的抗青枯病性能测定，试验结果表明桉树不同桉树无性系抗性强弱差异显著。采用打孔法和浸根法测定了0.1亿多粘类芽孢杆菌细粒剂对青枯病原菌的室内拮抗作用和温室生防效果，结果表明：多粘类芽孢杆菌对青枯菌具有显著的抑菌效果，抑菌圈平均直径达到10.3mm。浸根法处理后不同桉树无性系组培苗青枯发病率均有一定程度的降低，生防效果随着抗性增加而升高。总体来看，多粘类芽孢杆菌细粒剂对桉树组培苗青枯病的发生有一定的防治作用。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-13
第一章绪论  13-31
  1.1 引言  13-15
    1.1.1 研究背景  13-14
    1.1.2 研究的目的和意义  14-15
    1.1.3 项目来源与经费  15
  1.2 国内外研究现状及评述  15-27
    1.2.1 桉树青枯病研究概述  15-17
    1.2.2 青枯病快速检测研究概况  17-22
    1.2.3 桉树青枯病生物防控技术研究进展  22-24
    1.2.4 多粘类芽孢杆菌研究进展  24-27
  1.3 研究目标和主要研究内容  27-29
    1.3.1 关键的科学问题和研究目标  27-28
    1.3.2 主要研究内容  28-29
  1.4 研究技术路线  29-31
第二章桉树青枯病原菌 PCR 快速检测及致病性测试  31-44
  2.1 试验材料及研究方法  32-35
    2.1.1 试验材料  32-33
    2.1.2 试验方法  33-35
  2.2 结果与分析  35-42
    2.2.1 桉树青枯病原菌细菌学特征  35-36
    2.2.2 桉树青枯病原菌生物型测定  36-37
    2.2.3 桉树病原菌 PCR 快速检测  37-39
    2.2.4 桉树青枯病原菌致病性初步测试  39-42
  2.3 小结  42-44
第三章桉树组培苗潜伏期和轻基质青枯菌 PCR 快速检测  44-50
  3.1 试验材料和研究方法  45-47
    3.1.1 试验材料  45
    3.1.2 试验方法  45-47
  3.2 结果与分析  47-49
    3.2.1 桉树组培苗中青枯菌 PCR 检测灵敏度的测定  47-48
    3.2.2 桉树组培苗轻基质中青枯菌 PCR 检测灵敏度的测定  48-49
  3.3 小结  49-50
第四章桉树无性系抗青枯性的测定及多粘类芽孢杆菌生物效果研究  50-61
  4.1 试验材料和研究方法  51-54
    4.1.1 试验材料  51
    4.1.2 试验方法  51-54
  4.2 结果与分析  54-59
    4.2.1 青枯菌接种浓度的测定结果  54-55
    4.2.2 伤根法桉树抗青枯病无性系的测定  55-56
    4.2.3 病原菌培养性状及 PCR 快速鉴定  56
    4.2.4 多粘类芽孢杆菌室内拮抗效果  56-57
    4.2.5 多粘类芽孢杆菌对桉树组培苗盆栽防治效果  57-59
  4.3 小结  59-61
第五章结论与讨论  61-64
  5.1 结论  61-62
  5.2 讨论  62-63
  5.3 展望  63-64
参考文献  64-72
在读期间的学术研究  72-73
致谢  73

桉树青枯病的快速检测及生物防控技术研究

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