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环渤海湾地区苹果再植病病原真菌分离鉴定及生防木霉菌株的筛选

作　者: 刘志
导　师: 于金凤
学　校: 山东农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 渤海湾苹果再植病镰孢菌平邑甜茶木霉
分类号: S436.611.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

渤海湾地区是我国苹果主栽区之一，在生产中面临着果树品种更新及新果园建立的问题，由于土地资源有限，很多新果园是在老果园基础上进行换茬再植，由此引起的苹果重茬障碍－再植病成为苹果园更新的主要限制因素。本研究对采自渤海湾地区老果园及再植果园土壤的潜在致病真菌进行诱集、分离和鉴定；以平邑甜茶为材料，探讨了分离得到的病原菌对甜茶株高、鲜重等生理指标的影响，明确造成苹果再植病害真菌病原的主要类群；利用对峙培养和温室盆栽方法测定筛选得到的木霉菌株的生防潜能。主要结果如下：1、从环渤海湾地区所采集的118份土壤样品中分离得到的潜在致病真菌包括：镰孢菌属、丝核菌属和轮枝孢属的真菌。其中镰孢菌属的数量最多，第一批土样分离、纯化得到到129株，第二批土样分离、纯化得到到212株，共计341株。初步统计结果表明，从重茬果园中分离得到的镰孢菌数量明显多于老果园。故而推测镰孢菌可能是造成环渤海湾地区苹果再植病的主要病原菌。2、运用形态学特征并结合EF-1α序列分析法对所得到到的341株镰孢菌进行鉴定。结果表明，这些镰孢菌分属4个种，分别为尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani)和轮枝镰孢菌(Fusariumverticillioide)。3、以平邑甜茶为材料从隶属4个不同种的镰孢菌中随机选取8株镰孢菌和1株立枯丝核菌（隶属AG4-HG-I群）进行了致病性测定，结果表明：轮枝镰孢菌和层出镰孢菌对平邑甜茶幼苗的株高、鲜重、叶面积、根长度、根系数量等生理指标的影响最为显著，其中轮枝镰孢菌32-1-4和1-10-1使幼苗的株高生长分别降低了47%和42%，层出镰孢菌1-4-2和1-2-1，使幼苗的株高生长降低了36%和38%；轮枝镰孢菌32-1-4和1-10-1使幼苗的根尖和侧根数量显著减少，比对照分别减少了53%和56%。立枯丝核菌对平邑甜茶幼苗的抑制作用相比相对较弱，但各项生理指标与对照相比也存在显著差异，因此我们认为造成环渤海湾地区苹果再植病的主要真菌病原是镰孢菌中的轮枝镰孢菌、层出镰孢菌和尖孢镰孢菌。4、从渤海湾地区土壤中纯化保存的256株木霉菌株中，经过初筛、复筛筛选得到一株对轮枝镰孢菌、层出镰孢菌有较好生防效果的木霉菌株2-15-5。室内平板对峙培养中菌株2-15-5对轮枝镰孢菌和层出镰孢菌的抑菌率分别为75.32%和70.83%；温室盆栽测定结果表明，接种木霉菌株2-15-5发酵菌剂的平邑甜茶幼苗的生理指标与空白对照没有显著差异，与接种病原菌的对照相比，株高增加了79%，鲜重增加了81%，叶面积增加了78%，表现为较好的生防潜能。

全文目录

英文缩略表  4-5
目录  5-8
中文摘要  8-10
Abstract  10-12
1 引言  12-25
  1.1 再植病害的研究进展  12-19
    1.1.1 再植病的特征及病因  13-15
      1.1.1.1 再植病的特征  13-14
      1.1.1.2 引起再植病的病因  14-15
    1.1.2 苹果再植病害  15-17
      1.1.2.1 苹果再植病的分类  15
      1.1.2.2 苹果再植病的病原  15-17
    1.1.3 苹果再植病害的防治  17-19
      1.1.3.1 调整栽培制度，合理轮作及培肥改土  17-18
      1.1.3.2 土壤消毒  18
      1.1.3.3 选择抗性砧木  18
      1.1.3.4 生物防治  18-19
  1.2 木霉属真菌的研究进展  19-23
    1.2.1 木霉的形态学特证  19-20
    1.2.2 木霉的生防机制  20-22
    1.2.3 木霉在生物防治中的应用  22-23
      1.2.3.1 土壤处理  22
      1.2.3.2 种子处理  22-23
      1.2.3.4 叶面果实喷施  23
  1.3 本研究的意义  23-25
2 材料与方法  25-34
  2.1 土样来源  25
  2.2 供试培养基  25-26
  2.3 土壤真菌的分离鉴定  26-28
    2.3.1 土样采集  26
    2.3.2 土壤真菌的分离鉴定  26-27
      2.3.2.1 稀释平板法  26
      2.3.2.2 土壤平板法  26-27
      2.3.2.3 植物诱导法  27
    2.3.3 土壤真菌的纯化  27
    2.3.4 土壤真菌的培养鉴定  27-28
  2.4 镰孢属真菌的鉴定及致病性测定  28-32
    2.4.1 供试菌株  28
    2.4.2 供试菌株形态鉴定  28
    2.4.3 供试菌株分子鉴定  28-32
      2.4.3.1 DNA 提取检测试剂  28-29
      2.4.3.2 DNA 提取步骤  29
      2.4.3.3 PCR 扩增  29-30
      2.4.3.4 特异性扩增片段的回收  30-31
      2.4.3.5 回收产物检测  31
      2.4.3.6 特异扩增片段的克隆  31
      2.4.3.7 克隆反应体系的建立  31
      2.4.3.8 转化  31
      2.4.3.9 单克隆检测  31
      2.4.3.10 序列测定及分析  31-32
    2.4.4 病原菌致病性测定  32
  2.5 生防木霉菌株的筛选  32-34
    2.5.1 木霉菌株生长速度的测定  32
    2.5.2 平板对峙培养  32-33
    2.5.3 高效拮抗木霉生防效果的测定  33-34
3 结果与分析  34-52
  3.1 苹果再植病病原菌的分离鉴定  34-36
  3.2 镰孢属真菌的鉴定及代表种致病性测定  36-44
    3.2.1 镰孢菌的形态描述  36-40
    3.2.2 镰孢菌的 EF-1α序列分析  40-41
    3.2.3 镰孢菌及丝核菌代表菌株的致病性测定  41-44
  3.3 高效生防木霉菌株的筛选  44-52
    3.3.1 木霉菌的初筛  44-46
    3.3.2 高效拮抗木霉菌的复筛  46-50
      3.3.2.1 拮抗丝核菌的木霉菌株的筛选  47-48
      3.3.2.2 拮抗镰孢菌的木霉菌株的筛选  48-50
    3.3.3 高效拮抗木霉生防效果测定  50-52
4 讨论  52-55
  4.1 环渤海地区苹果再植病原菌的分离鉴定  52-53
  4.2 镰孢属真菌的鉴定和主要病原菌的致病性测定  53
  4.3 高效生防木霉菌株的筛选  53-55
5 结论  55-56
参考文献  56-63
致谢  63

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