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粉红粘帚霉QST-98固态发酵条件及制剂研究

作　者: 王海栋
导　师: 王繁业
学　校: 青岛科技大学
专　业: 药物化学
关键词: 固态发酵 粉红粘帚霉 响应面 可湿性粉剂 悬浮率
分类号: S476.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


粉红粘帚霉QST-98(Clonostachys rosea QST-98)是本实验室经过诱变得到的高效生防菌株,具有许多优良特性,能有效防控番茄灰霉病、小麦纹枯病、大豆菌核病等植物病害。本文旨在筛选出粉红粘帚霉最佳发酵培养基配方,对粉红粘帚霉孢子可湿性粉剂进行了工艺和处方研究,为工业化生产提供工业参数并降低成本。本实验在实验室前期筛选出的发酵培养基配方和自制的发酵器基础上对粉红粘帚霉固态发酵产孢子的条件进行了筛选。首先通过单因素试验初步确定了对菌株产孢子影响较大培养基厚度、温度和开孔率三个因素,然后利用响应面和Box-Benhnken模型对粉红粘帚霉的固态发酵培养条件进行了筛选和优化,最终得到了最优条件：培养温度24℃、初始pH7.0、开孔率0.74%、培养基厚度3cm、光照条件下采用前三代菌种。最终发酵产孢量可达9.93×109个／克干培养基,最佳发酵时间缩短为10天,大大节省了工业化生产成本。对粉红粘帚霉孢子可湿性粉剂的制备工艺和处方进行了研究。本实验通过对孢子回收方法、打碎时间、干燥温度等工艺条件进行探索实验得出了得到原料药孢子粉的最合适工艺条件；通过生物相容性试验和单因素试验确定了所选用的助剂种类和大体比例；考虑各种助剂之间的相互作用,通过对各种助剂设计正交试验,得出了最终的最优配方：硅藻土：孢子粉=5：1；木质素磺酸钠6%；荧光素钠1%,孢子打碎时间20s,烘干温度35℃通过对润湿时间、悬浮率、过筛率等的检测表明该粉红粘帚霉可湿性粉剂的性能指标基本符合要求,研究了贮藏条件对稳定性影响,粗略发现对萌发率、悬浮率、润湿时间影响不大。得到结果为：润湿时间53.94s,悬浮率82.34%,过筛率94.52%,水分1.68%,贮藏45天后萌发率为91.3%,均符合国家要求。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-10
第一章 前言  10-29
  1.1 引言  10
  1.2 粉红粘帚霉的发现及生物学特性  10-11
    1.2.1 粉红粘帚霉的发现  11
    1.2.2 粉红粘帚霉的生物学特性  11
  1.3 粉红粘帚霉的生防能力研究  11-14
    1.3.1 粉红粘帚霉的防治能力  12
    1.3.2 粉红粘帚霉生防作用的种类  12-14
      1.3.2.1 竞争作用  13
      1.3.2.2 抗生作用  13
      1.3.2.3 重寄生作用  13
      1.3.2.4 溶菌作用  13
      1.3.2.5 促生和诱导作用  13-14
  1.4 粉红粘帚霉固体发酵条件  14-17
    1.4.1 固态发酵的特点  14
    1.4.2 固态发酵条件的的选择  14-17
      1.4.2.1 发酵基基质  14-15
      1.4.2.2 发酵温度及传热  15
      1.4.2.3 发酵PH值  15-16
      1.4.2.4 通气量  16-17
      1.4.2.5 培养基含水量  17
  1.5 固态反应器的种类  17-19
    1.5.1 浅盘发酵反应器  18
    1.5.2 转鼓式发酵反应器  18
    1.5.3 填充床发酵反应器  18-19
    1.5.4 柱式发酵反应器  19
  1.6 响应面相关研究  19-21
    1.6.1 响应面的基本思想  19-20
    1.6.2 响应面在微生物发酵上的应用  20-21
  1.7 生物农药制剂研究  21-25
    1.7.1 生物农药剂型的选择因素  21-22
    1.7.2 生物农药的主要剂型  22-24
      1.7.2.1 粉剂  22
      1.7.2.2 可湿性粉剂  22-23
      1.7.2.3 乳油  23
      1.7.2.4 颗粒剂  23
      1.7.2.5 混合剂型  23-24
    1.7.3 影响粉红粘帚霉制剂稳定性因素  24-25
      1.7.3.1 载体  24
      1.7.3.2 含水量  24
      1.7.3.3 制剂包装  24
      1.7.3.4 温度、湿度、光照  24-25
    1.7.4 粉红粘帚霉孢子贮存方法  25
    1.7.5 粉红粘帚霉剂型的确定  25
  1.8 可湿性粉剂的质量指标  25-27
    1.8.1 流动性  25
    1.8.2 润湿性  25
    1.8.3 分散性  25-26
    1.8.4 悬浮性  26
    1.8.5 细度  26
    1.8.6 水分  26-27
    1.8.7 起泡性  27
    1.8.8 贮存稳定性  27
  1.9 研究的目的和内容  27-29
    1.9.1 研究的目的和意义  27-28
    1.9.2 研究的主要内容  28-29
第二章 粉红粘帚霉固态发酵条件的优化  29-50
  2.1 实验材料  29-32
    2.1.1 供试菌株及来源  29
    2.1.2 主要试剂、原料及生产厂家  29-30
    2.1.3 主要实验仪器及生产厂家  30-31
    2.1.4 主要培养基组成  31
    2.1.5 试剂的配制  31-32
  2.2 实验方法  32-35
    2.2.1 种子培养及测定方法  32
      2.2.1.1 菌种培养  32
      2.2.1.2 平板产孢量的测定方法  32
    2.2.2 粉红粘帚霉固态发酵及产孢量  32-35
      2.2.2.1 固态培养方法  32-33
      2.2.2.2 开孔率计算方法  33
      2.2.2.3 固态培养基含水量的测定方法  33-34
      2.2.2.4 固态培养基产孢量的测定方法  34
      2.2.2.5 固态发酵操作的优化方法  34
      2.2.2.6 响应面优化设计  34-35
      2.2.2.7 固态发酵产物的保存  35
  2.3 实验结果与讨论  35-49
    2.3.1 单因素试验结果  35-39
      2.3.1.1 人工搅拌对产孢的影响  35-36
      2.3.1.2 发酵温度对产孢的影响  36
      2.3.1.3 初始pH对产孢的影响  36-37
      2.3.1.4 空气湿度对产孢量的影响  37-38
      2.3.1.5 光照条件对产孢影响  38
      2.3.1.6 粉红粘帚霉固体发酵时间的确定  38-39
    2.3.2 响应面  39-48
      2.3.2.1 培养基初始含水量对产孢量的影响  39-40
      2.3.2.2 开孔率对产孢量的影响  40-42
      2.3.2.3 发酵培养基厚度对产孢量的影响  42-43
      2.3.2.4 响应面优化结果  43-48
    2.3.3 最佳培养条件下的产孢量  48-49
  2.6 本章小结  49-50
第三章 粉红粘帚霉可湿性粉剂的制备  50-70
  3.1 实验材料  50-52
    3.1.1 供试菌株及来源  50
    3.1.2 主要试剂、原料及生产厂家  50-51
    3.1.3 主要仪器及生产厂家  51-52
    3.1.4 标准硬水的配制  52
  3.2 粉红粘帚霉孢子粉检测指标  52-54
    3.2.1 孢子粉的制备方法  52
    3.2.2 孢子粉的质量指标检测  52-53
      3.2.2.1 孢子粉含水量的测定  52
      3.2.2.2 孢子粉含孢量的测定  52-53
      3.2.2.3 孢子粉孢子萌发率的测定  53
    3.2.3 可湿性粉剂助剂的筛选  53-54
      3.2.3.1 载体的筛选  53
      3.2.3.2 润湿分散剂的筛选  53
      3.2.3.3 稳定剂的筛选  53
      3.2.3.4 紫外保护剂的筛选  53-54
      3.2.3.5 助剂与孢子粉比例的确定  54
  3.3 粉红粘帚霉可湿性粉剂性能指标及测定方法  54-56
    3.3.1 可湿性粉剂质量控制指标  54-55
      3.3.1.1 流动性  54
      3.3.1.2 水分含量  54-55
      3.3.1.3 润湿性  55
      3.3.1.4 悬浮性  55
      3.3.1.5 细度  55
      3.3.1.6 贮藏稳定性  55
    3.3.2 可湿性粉剂质量指标测定方法  55-56
      3.3.2.1 农药PH值的测定方法  55
      3.3.2.2 农药润湿时间的测定方法  55-56
      3.3.2.3 农药悬浮率的测定方法  56
      3.3.2.4 农药细度的测定方法  56
  3.4 实验结果与讨论  56-67
    3.4.1 孢子粉干燥条件的研究  56-59
      3.4.1.1 烘干温度对孢子萌发率的影响  56-58
      3.4.1.2 通风条件的影响  58
      3.4.1.3 孢子粉打碎时间的确定  58-59
    3.4.2 生物相容性试验  59-61
      3.4.2.1 载体种类的筛选  59-60
      3.4.2.2 其它助剂对孢子粉活力的影响  60-61
    3.4.3 各添加剂比例的确定  61-63
      3.4.3.1 载体及润湿剂比例的确定  61
      3.4.3.2 稳定剂比例的确定  61-62
      3.4.3.3 紫外保护剂剂比例的确定  62-63
    3.4.4 正交试验  63-66
    3.4.5 实验结果  66-67
  3.5 粉红粘帚霉可湿性粉剂质量测定及讨论  67-69
    3.5.1 农药水分含量  67
    3.5.2 农药润湿时间  67
    3.5.3 农药悬浮率  67-68
    3.5.4 过筛率  68
    3.5.5 贮藏稳定性  68-69
  3.6 本章小结  69-70
全文结论  70-71
参考文献  71-76
致谢  76-77
攻读学位期间发表的论文  77-78

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 各种防治方法 > 生物防治 > 微生物病源的利用
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