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角鲨烯的抗氧化活性及其脂质体制备研究

作　者: 雷茜茜
导　师: 赵松林
学　校: 海南大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 角鲨烯脂质体角鲨烯脂质体抗氧化包埋率粒径稳定性
分类号: TS254.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

角鲨烯是一种典型的生物活性物质,具有抗氧化、抗衰老、抗疲劳及抗肿瘤等多种生理功能,然而,角鲨烯本身含有六个双键,极不稳定,在空气中易氧化,本研究通过脂质体包埋技术解决了这一问题。本研究首先评价了角鲨烯的抗氧化性质,进而分析了其自动氧化能力,用薄膜-冷冻干燥法和乙醚注入法制备角鲨烯脂质体来防止其氧化,并对制备工艺进行了优化,最后对脂质体的稳定性做了进一步的分析,具体研究内容和结果如下：1.通过测定角鲨烯对猪仔皮肤中SOD、GSH-Px和CAT活力,蛋白质羰基含量和氢过氧化物含量的作用,结果表明角鲨烯能显著提高猪仔皮肤中SOD、 GSH-Px和CAT活力,降低皮肤组织中蛋白质羰基和氢过氧化物含量,其作用较维生素E要好,间接证明了角鲨烯可以抗氧化。2.采用差示热量扫描仪测试角鲨烯和维生素E的热变曲线,结果表明角鲨烯比维生素E易自动氧化,其自动氧化曲线显示角鲨烯从120℃开始到340℃有明显变化。3.利用薄膜蒸发-超声法、薄膜-冷冻干燥法和乙醚注入法来制备脂质体,结果表明后两种方法制备的产物的包埋率明显高于第一种方法,所以选用薄膜-冷冻干燥法和乙醚注入法做进一步试验。4.通过单因素实验对薄膜-冷冻干燥法工艺进行筛选,结果表明卵磷脂与胆固醇质量比、角鲨烯添加量、水浴温度及海藻糖浓度对角鲨烯脂质体的包埋率影响较大,卵磷脂与胆固醇的质量比加大,其包埋率也呈一样的线性关系；随着角鲨烯添加量递增,其包埋率有很明确的递增趋势；在50℃的水浴温度下,角鲨烯脂质体的包埋率最为理想；包埋率与海藻糖浓度成正比例关系。进一步进行正交优化试验,筛选出制备工艺中影响因素的主次顺序为：卵磷脂与胆固醇质量比(A)>角鲨烯添加量(B)>水浴温度(D)>海藻糖浓度(C),优化的工艺组合为A3B3C3D2。5.通过单因素实验对乙醚注入法工艺进行筛选,结果表明卵磷脂与胆固醇质量比、角鲨烯添加量、PEG2000浓度及磁力搅拌速率对角鲨烯脂质体的包埋率影响较大,随着卵磷脂与胆固醇质量比逐渐增大,其包埋率也逐渐增大；随着角鲨烯添加量的递增,其脂质体包埋率有很明确的递增趋势,且包埋率普遍较高；脂质体包埋率在磁力搅拌速率为120r/min时较为理想；脂质体包埋率随着PEG2000含量的增加会不断上升。对乙醚注入法进行止交试验优化工艺条件,筛选出制备工艺中影响因素的主次顺序为：磁力搅拌速率(D)>PEG2000含量(C)>卵磷脂与胆固醇质量比(A)>角鲨烯添加量(B),优化的工艺组合为A2B3C3D2。6.检测优化条件下生成的脂质体的稳定性,结果表明薄膜-冷冻干燥法制备的脂质体的平均包埋率为92.85%,乙醚注入法制备的脂质体的平均包埋率为93.57%,包埋效果很好。薄膜-冷冻干燥法制得的角鲨烯脂质体的相变温度为115℃左右,峰较稳定,粒径大小为1299nm,在卵磷脂与胆固醇质量比变化的情况下制备的脂质体的粒径大小有逐渐递减趋势；乙醚注入法制得的角鲨烯脂质体的相变温度为118℃左右,峰较稳定,粒径大小为1287nm,属于大单层脂质体,粒径大小受磁力搅拌速率影响,在磁力搅拌速率为120r/min时的脂质体粒径最为理想。薄膜蒸发-冷冻干燥法较乙醚注入法制备的脂质体pH值变化小。乙醚注入法脂质体中MDA含量明显比薄膜蒸发-冷冻干燥法的高。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-9
目录  9-11
1 绪论  11-21
  1.1 概述  11-12
  1.2 角鲨烯的研究进展  12-15
    1.2.1 来源  12-13
    1.2.2 角鲨烯的生物活性  13-14
    1.2.3 角鲨烯的应用  14-15
  1.3 脂质体的研究进展  15-19
    1.3.1 脂质体的类型  15
    1.3.2 脂质体的制备方法  15-17
    1.3.3 脂质体稳定性的评价  17-19
  1.4 研究的主要内容及目的意义  19-21
    1.4.1 本文研究的主要内容  19-20
    1.4.2 本课题的目的及意义  20-21
2 材料与方法  21-28
  2.1 材料  21-22
    2.1.1 主要原料  21
    2.1.2 主要试剂  21-22
    2.1.3 主要仪器设备  22
  2.2 实验方法  22-27
    2.2.1 角鲨烯抗氧化能力测定  22-23
    2.2.2 角鲨烯自动氧化测定  23
    2.2.3 角鲨烯脂质体制备  23-24
    2.2.4 制备工艺条件优化  24-25
    2.2.5 正交试验设计  25-26
    2.2.6 角鲨烯脂质体稳定参数鉴定  26-27
  2.3 数据表格处理方法  27-28
3 结果与分析  28-47
  3.1 角鲨烯抗氧化能力测定  28-31
    3.1.1 猪仔皮肤超氧化物歧化酶(SOD)活力测定结果  28
    3.1.2 猪仔皮肤中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力测定结果  28-29
    3.1.3 猪仔皮肤中过氧化氢酶(CAT)活力测定结果  29
    3.1.4 猪仔皮肤中蛋白质羰基含量测定结果  29-30
    3.1.5 猪仔皮肤中蛋白质氢过氧化物含量测定结果  30-31
  3.2 角鲨烯自动氧化曲线  31-32
  3.3 角鲨烯脂质体制备工艺的单因素试验结果  32-35
    3.3.1 三种制备方法的筛选  32
    3.3.2 单因素工艺筛选  32-35
  3.4 正交试验结果  35-38
    3.4.1 薄膜-冷冻干燥法正交试验结果  35-37
    3.4.2 乙醚注入法优化结果  37-38
  3.5 脂质体稳定性研究  38-47
    3.5.1 脂质体包埋率测定  38-41
    3.5.2 脂质体的DSC测定  41-43
    3.5.3 脂质体粒径的测定  43-45
    3.5.4 脂质体混悬液pH测定  45-46
    3.5.5 脂质体混悬液中MDA含量的鉴定  46-47
4 结论  47-49
5 存在问题及展望  49-50
参考文献  50-56
致谢  56-57
硕士研究生期间发表论文  57

角鲨烯的抗氧化活性及其脂质体制备研究

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