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不同脱脂条件对米糠蛋白提取及结构的影响研究

作　者: 范馨文
导　师: 翟爱华
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 农产品加工与贮藏工程
关键词: 脱脂 Osbrone法米糠蛋白二级结构
分类号: TS210.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

本试验以新鲜米糠为原料，研究在不同的脱脂条件下，提出米糠四种分级蛋白，研究其溶解性和二级结构的变化规律及影响因素。主要研究内容、结论如下：1、通过正交试验确定乙醚脱脂法和超临界CO2萃取法的脱脂工艺，以及不同的脱脂条件下，米糠蛋白的溶解性。超临界CO2萃取法脱脂新鲜米糠的最佳工艺条件是：萃取压力为35MPa、萃取温度为50℃、萃取时间为2.5h。在最佳条件下米糠蛋白的溶解度为69.2%。乙醚浸提法脱脂新鲜米糠的最佳工艺条件是：脱脂温度为55℃、脱脂时间为2h、料液比为1：12(g/mL)。在最佳条件下米糠蛋白的溶解度为44.3%。对于两种不同的脱脂方式，得出超临界CO2萃取法脱脂米糠后，能提高米糠蛋白的溶解度。2、以超临界萃取脱脂米糠为原料，根据Osbrone法，分级提取出米糠清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白，并优化清蛋白和球蛋白的提取工艺。采用响应面分析法，最后分析出最优提取条件。试验确定米糠清蛋白的最佳提取工艺参数为料液比为1：11、提取温度为45℃、提取时间为3h。在该条件下，米糠清蛋白的实际提取率可达到80.95%。确定出提取米糠球蛋白的最佳工艺条件为料液比为1：12、提取温度为40℃、提取时间为2.5h、NaCl浓度2%，在该条件下，可以得到实际蛋白提取率为79.93%。3、纯化并比较出不同脱脂条件下米糠四种分级蛋白，通过高效液相色谱法测定后，确定出米糠各组分蛋白的分子量范围，米糠清蛋白组分的分子量范围在102.329kDa～57.543kDa之间，米糠球蛋白组分的分子量范围在95.499kDa～44.668kDa之间，米糠醇溶蛋白组分的分子量范围在16.218kDa～13.803kDa之间，米糠谷蛋白组分的分子量范围在56.234kDa～47.8633kDa之间。4、试验利用圆二色光谱，对不同脱脂条件下提取出的米糠清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白进行二级结构测定，采用曲线拟合软件Selcon3［79-80］计算米糠四种分级蛋白二级结构中α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲的相对含量。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-10
第一章绪论  10-24
  1.1 米糠  10-14
    1.1.1 米糠概述  10-11
    1.1.2 米糠的组成  11
    1.1.3 米糠的营养价值  11-12
    1.1.4 米糠的国内研究现状  12-13
    1.1.5 米糠的国外研究现状  13
    1.1.6 米糠的深加工制品  13-14
  1.2 米糠蛋白粉概况  14-15
    1.2.1 米糠蛋白的制备提取  14
    1.2.2 米糠蛋白粉氨基酸组成  14-15
    1.2.3 米糠蛋白理化性质  15
  1.3 脱脂方法简介  15-18
    1.3.1 超临界 CO_2 萃取脱脂简介  15-17
    1.3.2 有机溶剂脱脂  17-18
  1.4 蛋白质概述  18-21
    1.4.1 蛋白质的生物多样性  18
    1.4.2 蛋白质一级结构  18-19
    1.4.3 二级结构  19-20
    1.4.4 三级结构  20
    1.4.5 四级结构  20-21
  1.5 蛋白质的分离纯化  21-22
  1.6 研究目的与意义  22
  1.7 试验研究的主要内容  22-24
第二章米糠脱脂工艺条件研究  24-35
  2.1 材料与仪器设备  24-25
    2.1.1 试验材料  24
    2.1.2 仪器设备  24-25
  2.2 试验方法  25-26
    2.2.1 米糠预处理  25
    2.2.2 米糠萃取工艺过程  25
    2.2.3 乙醚溶剂浸提工艺过程  25
    2.2.4 米糠蛋白提取  25
    2.2.5 米糠溶解性测定  25-26
    2.2.6 蛋白质含量与脂肪含量测定  26
  2.3 试验结果与分析  26-34
    2.3.1 米糠中脂肪含量检测  26
    2.3.2 米糠蛋白的基本成分测定  26
    2.3.3 超临界萃取脱脂参数对米糠蛋白溶解性的影响  26-29
    2.3.4 乙醚浸提脱脂参数对米糠蛋白溶解性的影响  29-33
    2.3.5 不同脱脂方式对米糠蛋白溶解性的对比分析  33-34
  2.4 本章小结  34-35
第三章脱脂米糠清蛋白及球蛋白的提取工艺  35-48
  3.1 材料和仪器  35
    3.1.1 原料和试剂  35
    3.1.2 仪器  35
  3.2 试验方法  35-36
    3.2.1 提取米糠分级蛋白工艺流程  35-36
    3.2.2 脱脂米糠的制备  36
    3.2.3 蛋白质提取率的计算  36
    3.2.4 蛋白质含量的测定  36
    3.2.5 米糠清蛋白和球蛋白的提取工艺  36
  3.3 实验结果与分析  36-47
    3.3.1 米糠清蛋白提取工艺的单因素试验  36-38
    3.3.2 米糠球蛋白提取工艺的单因素试验  38-40
    3.3.3 米糠清蛋白响应面试验分析  40-43
    3.3.4 米糠球蛋白响应面试验分析  43-47
  3.4 本章小结  47-48
第四章米糠蛋白的凝胶色谱分离纯化研究  48-60
  4.1 材料和仪器设备  48-49
    4.1.1 试验材料  48
    4.1.2 仪器  48-49
  4.2 试验方法  49-50
    4.2.1 凝胶层析分离纯化  49
    4.2.2 不同脱脂条件下的米糠分级蛋白纯化  49-50
    4.2.3 高效液相色谱分析  50
  4.3 试验结果和分析  50-59
    4.3.1 不同脱脂条件下的米糠分级蛋白的 Sephadex G-100 分离纯化结果研究  50-54
    4.3.2 高效液相色谱分法确定分子量范围  54-59
  4.4 本章小结  59-60
第五章米糠蛋白的二级结构测定  60-70
  5.1 材料与仪器设备  60-61
    5.1.1 试验材料  60-61
    5.1.2 仪器设备  61
  5.2 试验方法  61
    5.2.1 蛋白质含量的测定  61
    5.2.2 米糠成分分析及米糠蛋白各组分含量  61
    5.2.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白分子量  61
    5.2.4 CD 光谱测米糠蛋白结构  61
  5.3 试验结果与分析  61-69
    5.3.1 蛋白质含量的测定  61-62
    5.3.2 米糠成分分析及米糠蛋白各组分含量  62
    5.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白分子量  62-63
    5.3.4 CD 光谱测米糠蛋白结构  63-69
  5.4 本章小结  69-70
第六章试验结果与创新点以及展望  70-72
  6.1 主要结论  70
  6.2 创新点  70-71
  6.3 建议  71-72
参考文献  72-78
致谢  78-79
作者简介  79
  个人情况  79
  教育背景  79
  工作经历  79
  该论文项目来源  79
  在研期间参与的课题与发表的论文  79

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