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一种高效检测石蜡切片中的DNA的方法研究

作　者: 杨青喜
导　师: 于源华；熊慧
学　校: 长春理工大学
专　业: 无机化学
关键词: 石蜡切片新型PCR检测体系 DNA抽提
分类号: TE626.88
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

为了克服传统石蜡标本中DNA较高的假阴性检测率,提高检出率准确性,本文从提高PCR反应效率和提高石蜡标本DNA抽提质量两方面进行研究。本文对12种PCR添加剂进行了研究。结果显示：海藻糖、DMSO、DTT、亚精胺、谷胱甘肽、甜菜碱都可以提高PCR反应效率和稳定性,建立了一种新型的荧光PCR反应检测体系。本文使用碱裂解法、TE溶液加热脱蜡及蛋白酶K与Chelex共同消化的方法对石蜡标本的DNA进行抽提。结果发现：石蜡标本经TE溶液加热脱蜡后Chelex与蛋白酶K共同消化处理获得的DNA可以较好的满足PCR检测的需求,其DNA检测结果与Qiagen试剂盒抽提的DNA的检测结果基本一致。建立了一个新的用于提取石蜡标本中DNA的方法。本文将500例石蜡标本进行抽提与检测。结果显示,新的抽提方法和新型荧光PCR反应体系对石蜡标本中DNA的检出率为94%(471/500),明显地增加了石蜡标本中DNA的检出率,可靠性强。研究表明：新构建的荧光PCR反应体系及石蜡标本DNA抽提方法可以满足普遍石蜡标本的检测要求,为以后石蜡标本的研究提供了一个较为可靠的检测平台。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
第一章绪论  8-23
  1.1 引言  8
  1.2 关于提高PCR反应效率的研究进展  8-17
    1.2.1 PCR及荧光定量PCR的定义  8-11
    1.2.2 PCR的抑制因素和可能的解决方案  11-17
  1.3 从石蜡切片中抽提DNA的研究进展  17-21
    1.3.1 石蜡标本的处理及选择  18
    1.3.2 脱蜡  18-19
    1.3.3 DNA的提取方法  19-21
    1.3.4 关于去除影响从石蜡切片中抽提出高质量的因素的研究  21
  1.4 论文研究的目的及意义  21-23
第二章一种新型PCR反应检测体系的建立  23-60
  2.1 实验材料与试剂  23-25
    2.1.1 实验材料  23
    2.1.2 常用实验试剂及配方  23-24
    2.1.3 试剂、工具酶和试剂盒来源  24-25
    2.1.4 仪器设备  25
    2.1.5 软件程序  25
  2.2 实验方法  25-27
    2.2.1 新鲜组织的抽提方法  25-26
    2.2.2 石蜡标本的抽提方法  26
    2.2.3 荧光PCR的方法对抽提好的DNA质量进行检测  26-27
  2.3 实验结果  27-58
    2.3.1 检测引物及探针的有效性  27-28
    2.3.2 一种新型PCR反应添加剂的研制及验证  28-58
  2.4 小结  58-60
第三章从石蜡切片中抽提DNA的方法研究  60-73
  3.1 实验材料与试剂  60-62
    3.1.1 实验材料  60
    3.1.2 实验试剂及配方  60-61
    3.1.3 试剂、工具酶和试剂盒来源  61-62
    3.1.4 仪器设备  62
    3.1.5 软件程序  62
  3.2 实验方法  62-65
  3.3 实验结果  65-71
    3.3.1 Qiagen试剂盒抽提石蜡标本DNA的检测结果  65-66
    3.3.2 使用碱裂解法抽提石蜡标本DNA的检测结果  66-67
    3.3.3 TE溶液加热脱蜡及蛋白酶K消化处理的抽提方法的检测及优化  67-71
  3.4 讨论  71-73
第四章新构建方法的适用性的检测  73-77
  4.1 实验材料与试剂  73
    4.1.1 实验材料  73
    4.1.2 常用试剂及仪器设备  73
  4.2 实验方法  73-75
    4.2.1 石蜡切片中DNA的抽提方法  73-74
    4.2.2 抽提后DNA的荧光PCR检测  74-75
  4.3 实验结果  75-76
  4.4 讨论  76-77
结论  77-78
致谢  78-79
参考文献  79-81

一种高效检测石蜡切片中的DNA的方法研究

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