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NGF及其受体对卵泡发育调控的分子机制研究
作 者: 王勇
导 师: 孙斐
学 校: 中国科学技术大学
专 业: 遗传学
关键词: 卵丘卵母细胞复合物(COCs) 神经营养因子受体酪氨酸激酶受体1型(TrkA) 白细胞介素6(IL-6) COC扩展
分类号: Q75
类 型: 博士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
TrkA是神经营养因子(NGF)高亲和力的受体,而NGF是神经营养因子家族中的一员,TrkA被认为在卵巢卵泡发育过程成起重要作用,例如其参与原始卵泡的装配,也能促进早期卵泡的发育,还能诱导次级卵泡的分化,还能够促进卵母细胞的排出。然后,关于TrkA在卵丘卵母细胞复合物(COCs)扩展过程中所起的作用还不清楚。在本研究中,我们发现TrkA在大的有腔卵泡中表达丰富,所以TrkA可能在卵泡发育的后期发挥作用,其中就包括COCs的扩展。在卵丘颗粒细胞中沉默TrkA会抑制表皮生长因子(EGF)诱导的COCs的扩展,而且还降低了卵母细胞排出的比率。所以TrkA参与EGF诱导的卵丘细胞的扩展是很明确的。‘TrkA在COCs扩展过程中所起的作用不是通过EGF的下游分子ERK1/2或SMAD的磷酸化来实现的,也不是通过上调COCs扩展相关基因,例如前列腺素内过氧化物合酶2(Ptgs2),透明质酸合成酶2(Has2),肿瘤坏死因子诱导蛋白6(Tnfaipd),以及pentraxin3(Ptx3)来实现的。因此在这个过程中可能存在一个新的COCs扩展相关基因。然而,用K252a对TrkA进行药物阻断,抑制其信号转导活性,可以导致卵丘颗粒细胞内白细胞介素6(IL-6)的mRNA表达和蛋白分泌水平的下降,而IL-6是通过我们对COCs进行K252a预处理,然后进行mRNA微阵列分析而筛选出来的。此外,IL-6还可以恢复K252a对EGF诱导的卵丘颗粒细胞扩展的抑制效应,也恢复了K252a对卵母细胞排出的抑制效应。而且,COCs扩展相关基因和IL-6一样,在卵丘颗粒细胞中还是炎症相关基因。因此,IL-6可能作为一个新的潜在的卵丘颗粒细胞扩展相关基因,也可能涉及到TrkA信号通路和EGF信号通路在影响COCs扩展方面的交汇。在本研究中,我们对TrkA在EGF诱导的卵丘颗粒细胞扩展过程中的作用提供了一个机制方面的见解。理解TrkA和EGF影响卵丘颗粒细胞扩展潜在性的交叉点,有助于我们发现一些排卵相关疾病的新的治疗靶点。
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全文目录
摘要 5-6 Abstract 6-8 第一章 文献综述 8-25 1.1 引言 8-10 1.2 NTs家族及受体与卵泡发育 10-25 1.2.1 NTs家族概括 10-17 1.2.2 NTs在卵巢中功能概述 17-23 1.2.3 临床意义及小结 23-25 第二章 研究工作结果与讨论 25-70 2.1 敲低卵丘细胞中的TrkA通过降调IL-6来抑制EGF诱导的COCs扩展 25-58 2.1.1 背景介绍 25-26 2.1.2 实验结果 26-55 2.1.3 结果分析与讨论 55-58 2.2 神经生长因子NGF对小鼠卵母细胞第一极体排出的影响 58-70 2.2.1 背景介绍 58-59 2.2.2 实验结果 59-68 2.2.3 结果与分析 68-70 第三章 实验材料与方法 70-77 3.1 实验动物 70 3.2 卵泡分离 70 3.3 COCs的分离和培养 70-71 3.4 RNA的分离和荧光实时定量PCR 71 3.5 westernblot(免疫印记分析) 71-74 3.6 腺病毒准备 74 3.7 mRNA芯片分析 74-75 3.8 酶联免疫吸附分析(Elisa) 75 3.9 卵巢囊内微注射 75 3.10 免疫组化实验(IHC) 75 3.11 细胞转染 75-76 3.12 主要仪器设备 76 3.13 统计分析 76-77 参考文献 77-96 致谢 96-97 在读期间发表的学术论文与取得的研究进展 97
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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 分子遗传学
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