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巨细胞、风疹病毒感染的实验室诊断及临床研究

作　者: 张萌
导　师: 霍正浩；马旭
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 遗传学
关键词: 巨细胞病毒风疹病毒重组抗原 IgG抗体育龄妇女
分类号: R446.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的研究并使用两种新的巨细胞病毒与风疹病毒的基因工程抗原,建立一种可广泛在出生缺陷一级预防中适用的检测巨细胞病毒和风疹病毒特异性IgG抗体的简便、快速且实用的实验室诊断方法,并在临床试验中评估这两种病毒IgG抗体的检测方法的临床有效性、安全性和可实用性。方法制备两个新的巨细胞病毒pp150/p52蛋白和风疹病毒E1蛋白,应用ELISA方法鉴定其抗原活性。基于酶联免疫吸附实验的间接法检测原理,以重组抗原包被聚苯乙烯固相载体,优化实验各环节中的条件,风疹病毒IgG抗体以世界卫生组织提供的标准品,巨细胞病毒IgG抗体以意大利DiaSorin公司生产的试剂盒中提供的标准品标定本方法中的标准血清和质控品。在临床试验部分,采用双盲法对1000例育龄妇女血清进行巨细胞病毒IgG抗体和风疹病毒IgG抗体的检测,最终评价本研究建立的检测方法在临床实践中的有效性。结果重组的巨细胞病毒pp150/p52蛋白和风疹病毒E1蛋白经鉴定表现出良好的抗原活性并明显优于其他多数抗原。通过比较最佳工艺流程:我们确定使用优化后的重组抗原;选择碳酸盐缓存液包被HCMV抗原、Tris缓冲液包被RV抗原、以3%脱脂奶粉作为封闭液、使用专供本研究应用的具有特色的变色标本稀释液和血清标本保存方法。在本研究中,巨细胞病毒特异的IgG抗体检测以0.7IU/ml作为抗巨细胞病毒IgG抗体的Cut-off值,并界定为巨细胞病毒已感染过的标准。风疹病毒特异的IgG抗体检测则以15IU/ml作为抗风疹病毒IgG抗体的Cut-off值并界定为可预防风疹感染的最低免疫力标准。WHO定为10IU/ml,我们考虑到低抗体水平可能发生再感染,所以定为15 IU/ml。通过比较本研究方法与经FDA认证的意大利DiaSorin公司的同类试剂(标准方法)对1000例临床标本的特异性IgG抗体检测,随后对检测数据进行统计学分析,结果显示,本研究建立的两种方法与标准方法间的检测结果均呈高度相关性,巨细胞病毒和风疹病毒检测方法的Kappa值分别为0.699和0.848,卡方检验以及McNemar检验得p值均小于0.05。我们建立的巨细胞病毒特异的IgG抗体检测方法的阳性预测值、阴性预测值和诊断效率分别为97.2%(923/950)、86.0%(43/50)、96.6%(966/1000);风疹病毒特异的IgG抗体检测方法的阳性预测值、阴性预测值和诊断效率分别为99.6 %(775/778)、82.4%(183/222)和95.8%(958/1000)。结论本研究建立的方法是针对在出生缺陷一级预防中的特定目标人群即育龄妇女,巨细胞病毒以0.7IU/ml作为临界值,风疹病毒以15IU/ml作为最低保护力水平,建立了简单有效且实用的检测巨细胞病毒特异性IgG抗体和风疹病毒特异的IgG抗体的检测方法。该方法可应用于人体内特别是待孕期的育龄妇女的巨细胞病毒、风疹病毒的感染情况判断和机体内保护性抗体水平的评测,也可应用于机体内巨细胞病毒和风疹病毒IgG抗体水平的动态检测,以及风疹病毒疫苗注射的指导与监测。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
前言  11-13
第一部分巨细胞病毒特异性IgG抗体的ELISA检测方法建立  13-32
  材料与方法  13-20
  结果  20-29
  讨论  29-31
  结论  31-32
第二部分风疹病毒特异性IgG 抗体的ELISA 检测方法建立  32-53
  材料与方法  32-40
  结果  40-51
  讨论  51-52
  结论  52-53
第三部分巨细胞、风疹病毒特异性IgG 抗体检测的临床研究  53-64
  研究目的  53
  材料与方法  53-58
  结果  58-61
  讨论  61-63
  结论  63-64
参考文献  64-67
文献综述  67-78
  综述参考文献  74-78
致谢  78-79
攻读学位期间发表的学术论文  79-80
个人简历  80

巨细胞、风疹病毒感染的实验室诊断及临床研究

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