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CPPU在苎麻植物组织培养上的应用

作　者: 窦文祥
导　师: 彭定祥
学　校: 华中农业大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 苎麻愈伤组织氯吡苯脲内源激素石蜡切片
分类号: S563.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

苎麻(Boehmeria nivea L.Gaud)是重要的韧皮纤维作物之一,在我国有悠久的栽培和加工历史。随着基因工程研究的越来越深入,苎麻基因工程特别是苎麻转基因技术也逐渐展开,苎麻离体再生体系的建立及优化愈显重要。本研究以苎麻优良品种“华苎4号”和“资兴麻”为材料,利用高效细胞分裂素氯吡苯脲(CPPU)进行苎麻离体再生研究,测定了不同CPPU对茎尖扩繁和愈伤组织诱导以及不定芽的分化的影响,测定了在不同CPPU浓度下形成的愈伤组织内源激素变化,对从茎段外植体形成的不同类型的愈伤组织进行了细胞学观察。主要研究结果如下：(1)在苎麻茎尖再生苗的扩繁应用上,与对照1.0 mg/L6-BA相比,CPPU是一种更高效的细胞分裂素,其最佳使用浓度对“华苎4号”和“资兴麻”分别为0.02、0.05 mg/L,最佳使用浓度为6-BA的五十分之一,其最高再生芽平均数为对照6-BA的2.6倍以上；在愈伤组织诱导和不定芽分化上,1.0 mg/L的CPPU最有利于华苎4号和资兴麻叶片愈伤的诱导和不定芽的分化,而“华苎4号”和“资兴麻”茎段的最佳再生浓度分别为0.2 mg/L和0.5 mg/L,与对照2.0mg/L6-BA相比,可见在竺麻再生应用上,CPPU生理活性是6-BA的4倍以上。0.2 mg/L～1.0 mg/L的CPPU有利于苎麻愈伤组织的形成和不定芽的分化。(2)在培养基中添加外源激素CPPU明显影响苎麻茎段外植体产生的愈伤组织中内源激素的含量和比例。随着外源CPPU浓度的增加,内源激素IAA、ABA、ZR含量升高,其中IAA、ABA升高到一定值后,含量趋于稳定,而ZR随着外源激素CPPU浓度升高含量增加。随着愈伤组织培养时间的延长,在不添加外源激素的情况下,内源激素整体含量下降；在添加外源激素的情况下,IAA和ZR的含量随着时间延长含量增加,ABA含量先增加后减少。结合研究结果1,可以推测,当苎麻愈伤组织中激素比例达到IAA/ZR=0.56和ABA/ZR=0.28时,此时外源激素CPPU浓度为0.5 mg／L,最有利于不定芽的分化。(3)通过对愈伤组织的徒手压片和石蜡切片观察,发现不定芽再生频率较高的愈伤组织表面有许多致密的细胞团,这些细胞团与周围形成生理隔离,细胞团内细胞比较规则,细胞质浓,细胞核大,线粒体大量存在。随着培养时间延长,可以清晰的看到芽原体出现。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
缩写词表  10-11
1 文献综述  11-20
  1.1 苎麻组织培养研究进展  11-16
    1.1.1 试管苗快速繁殖  12
    1.1.2 苎麻器官发生研究  12-16
      1.1.2.1 直接再生不定芽  12-13
      1.1.2.2 "二步法"  13-16
  1.2 CPPU研究进展及其应用  16-18
    1.2.1 CPPU研究进展  16-17
    1.2.2 CPPU在植物组织培养上的应用  17-18
    1.2.3 CPPU在农业生产中应用  18
  1.3 选题目的和意义  18-20
2 材料与方法  20-25
  2.1 材料  20-21
    2.1.1 CPPU对苎麻茎尖再生和愈伤形成以及不定芽分化的影响  20
    2.1.2 外源激素CPPU对苎麻愈伤组织内源激素的影响  20
    2.1.3 苎麻愈伤组织的光学显微镜观察  20
    2.1.4 苎麻愈伤组织的石蜡切片观察  20-21
  2.2 方法  21-25
    2.2.1 CPPU对苎麻茎尖再生和愈伤形成以及不定芽分化的影响  21-22
      2.2.1.1 仪器设备  21
      2.2.1.2 无菌苗和外植体的准备  21
      2.2.1.3 实验设计  21
      2.2.1.4 培养基配制  21-22
      2.2.1.5 培养条件  22
      2.2.1.6 重复设计和数据分析  22
    2.2.2 高效液相色谱法测植物内源激素  22-23
      2.2.2.1 仪器设备  22
      2.2.2.2 试剂及药品  22
      2.2.2.3 标样的配制  22
      2.2.2.4 方法步骤  22-23
    2.2.3 苎麻愈伤组织的光学显微镜观察  23
      2.2.3.1 药品和仪器  23
      2.2.3.2 实验步骤  23
    2.2.4 苎麻愈伤组织的石蜡切片观察  23-25
      2.2.4.1 试剂和仪器  23-24
      2.2.4.2 方法步骤  24-25
3 结果与分析  25-40
  3.1 CPPU对苎麻无菌苗生长的影响  25-28
  3.2 CPPU对苎麻外植体愈伤组织形成和不定芽分化的影响  28-33
  3.3 外源激素CPPU对苎麻茎段外植体愈伤组织内源激素的影响  33-36
  3.4 苎麻愈伤组织的光学显微镜观察  36-38
  3.5 苎麻愈伤组织的石蜡切片观察  38-40
4 讨论与结论  40-44
  4.1 影响苎麻愈伤组织诱导以及不定芽分化的因素  40-41
  4.2 外源激素对内源激素的影响  41
  4.3 苎麻胚胎发育的特征  41-42
  4.4 结论  42-43
  4.5 展望  43-44
附录  44-46
参考文献  46-52
致谢  52

CPPU在苎麻植物组织培养上的应用

内容摘要

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