学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

草鱼PGC-1α基因的克隆及其表达的研究

作　者: 刘品
导　师: 吉红
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 水生生物学
关键词: PGC-1α 草鱼 HUFA 线粒体 脂质代谢
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 25次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator-1α, PGC-1α)在调节能量代谢中发挥重要的作用。它参与适应性产热、线粒体生成、葡萄糖摄取、肝脏糖异生、肝脏脂肪酸β氧化、脂肪细胞分化、肌肉类型转换等多种代谢过程。草鱼腹腔脂肪组织的过度发育比较严重。脂肪组织的过度发育势必造成脂代谢的紊乱,影响生长,因此对其脂质代谢相关的能量利用机理进行研究非常重要。研究PGC-1α基因及脂质代谢相关的PGC-1α、PPARs、LPL等几个基因在离体和在体状态下受到多不饱和脂肪酸影响的机制,有助于深入了解鱼类能量代谢的分子机理。本试验以草鱼为研究对象,从PGC-1α基因的克隆入手,初步探讨了在体和离体条件下高不饱和脂肪酸对PGC-1α基因及脂质代谢相关基因表达的影响,得出如下结果:1 .克隆得到草鱼PGC-1α基因部分cDNA序列( GenBank注册号为HM015283),大小为612bp,与GenBank已发表的人、牛、小鼠、斑马鱼和金鱼等动物的同源性达到75%～97%,实时定量检测结果表明该基因在草鱼肝胰脏、肾脏、肌肉、心脏、鳃等十个组织中均有表达,其中在肾脏和心脏中表达丰度最高,在精巢和脾脏中表达丰度最低。2.HUFA饲喂草鱼稚鱼,经时序采样后的研究结果表明:草鱼摄食含HUFA饲料1周后PGC-1α基因的表达水平极显著升高,随后又迅速下降。草鱼肝胰脏脂质含量与PGC-1α变化趋势相反,呈现先降低后升高的趋势。这些结果说明草鱼肝胰脏PGC-1α基因表达受到HUFA的调控,肝胰脏脂质含量也发生明显的变化,推测二者之间存在一定的联系。3.草鱼脂肪细胞体外培养实验结果表明,EPA促进了脂肪细胞的增殖,对其分化呈现先抑制后促进的趋势。基因表达检测结果与油红O染色提取结果一致,在分化初期EPA促进了脂肪细胞分化相关基因LPL的表达,抑制了脂质降解基因PPARα的表达。而DHA却抑制了PPARs家族和LPL基因的表达。两种脂肪酸均抑制了线粒体相关基因PGC-1α的表达。通过以上研究,表明多不饱和脂肪酸可能通过调控PGC-1α基因的表达影响线粒体的生成从而对草鱼腹腔脂质蓄积产生影响。

全文目录


摘要  6-7
ABSTRACT  7-11
文献综述  11-26
  第一章PGC-1α对生物代谢过程中能量代谢的调控作用  11-16
    1.1 PGC-1α作用的分子机制  11-13
    1.2 PGC-1α信号传递与肝脏功能  13-14
    1.3 PGC-1α在胰岛素抗性和糖尿病中的作用  14-16
  第二章 脂肪细胞分化与代谢过程中的线粒体变化  16-19
    2.1 线粒体在细胞中的作用  16-17
    2.2 脂质生成过程中线粒体的生成  17
    2.3 脂质生成和脂质降解过程中线粒体的变化  17-19
  第三章 多不饱和脂肪酸对脂肪细胞增殖分化的调控作用  19-26
    3.1 鱼类脂肪细胞培养体系简介  19-21
    3.2 脂肪细胞发育过程中基因表达的变化  21-24
    3.3 多不饱和脂肪酸对脂肪细胞的影响  24-26
      3.3.1 PUFA 通过激活PPARγ诱导脂肪细胞分化  24-25
      3.3.2 PUFA 作为PPARα的激活剂  25-26
试验研究  26-51
  第四章 PGC-1α基因的克隆及其组织差异表达  26-32
    4.1 材料与方法  26-28
      4.1.1 试验鱼  26
      4.1.2 主要试剂和仪器  26-27
      4.1.3 草鱼PGC-1α基因克隆及序列分析  27
      4.1.4 qRT-PCR 检测PGC-1α基因在草鱼10 个组织中的表达情况  27-28
      4.1.5 数据分析  28
    4.2 结果  28-30
      4.2.1 草鱼PGC-1α基因部分cDNA 的克隆及序列分析  28-29
      4.2.2 PGC-1α基因在草鱼各组织中的表达  29-30
    4.3 讨论  30-32
  第五章 饲喂DHA 和EPA 对草鱼 PGC-1α基因时序表达的影响  32-40
    5.1 试验材料与方法  32-35
      5.1.1 试验动物  32
      5.1.2 主要试剂和仪器  32
      5.1.3 试验分组与采样  32-34
      5.1.4 香草醛比色法检测肝胰脏脂质含量变化  34
      5.1.5 荧光实时定量PCR 检测PGC-1α表达  34
      5.1.6 草鱼肝胰脏电镜切片制作与观察  34-35
      5.1.7 数据分析  35
    5.2 试验结果  35-38
      5.2.1 饲喂HUFA 对草鱼肝胰脏脂质含量的影响  35
      5.2.2 饲喂HUFA 对草鱼肝胰脏基因时序表达的影响  35-37
      5.2.3 HUFA 对草鱼稚鱼肝胰脏细胞线粒体的影响  37-38
    5.3 讨论  38-40
  第六章 DHA 和EPA 对草鱼前体脂肪细胞增殖分化及PGC-1α基因表达的影响  40-49
    6.1 试验材料与方法  40-42
      6.1.1 试验材料  40-41
      6.1.2 试验方法  41-42
      6.1.3 数据分析  42
    6.2 结果与分析  42-47
      6.2.1 EPA 对草鱼前体脂肪细胞增殖的影响  42-43
      6.2.2 EPA 对草鱼脂肪细胞分化的影响  43-45
      6.2.3 EPA 和DHA 对草鱼脂肪细胞分化初期PGC-1α基因表达的影响  45-47
    6.3 讨论  47-49
  第七章 综合讨论与结论  49-51
    7.1 HUFA 通过调控PGC-1α基因对草鱼脂质代谢的影响  49-50
    7.2 下一步研究工作  50
    7.3 结论  50-51
参考文献  51-63
附录  63-65
致谢  65-66
作者简介  66

相似论文

  1. 草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆、表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位研究,S941.41
  2. 翡翠贻贝糖胺聚糖降血脂作用的研究,R285.5
  3. 西施舌精子冷冻保存及其冷冻损伤机理研究,S968.3
  4. 调和玉米油对肉仔鸡抗氧化应激、脂质代谢酶及免疫基因表达的影响,S831.5
  5. 南京地区西花蓟马Frankliniella occidentalis （Pergande）的发生调查及其线粒体基因组研究,S433
  6. 寄主型和迁飞型棉蚜在交配行为、mtDNA与共生菌相关基因上的分化,S433
  7. 一个芥菜型油菜品种资源的线粒体基因组序列分析,S565.4
  8. 18氟—氟代脱氧葡萄糖诱导Eca-109食管癌细胞凋亡的初步研究,R735.1
  9. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导人结肠癌细胞凋亡线粒体信号转导机制的研究,R735.35
  10. 草鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备及其性质研究,TS254.9
  11. 草鱼NCCRP-1和IL-10基因的克隆和表达,S917.4
  12. 右旋柠烯通过线粒体途径诱导人白血病细胞凋亡,R733.7
  13. 动物性中药材地龙DNA条形码的初步研究,R282.5
  14. 缺氧后处理影响肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体途径凋亡机制的研究,R563.8
  15. 草鱼鱼鳞胶原蛋白的若干生物学性能研究,S917.4
  16. 薯蓣皂苷诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡及作用机制研究,R285.5
  17. 二氮嗪后处理在大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究,R965
  18. 四种菜籽饼粕在草鱼饲料中的应用研究,S963.314
  19. 饲料磷源、磷水平及酸化剂对草鱼生长、生理的影响,S963
  20. 过度训练及丹参注射液对大鼠心肌细胞凋亡的影响研究,G804.2
  21. PGC-1α在多发性骨髓瘤的表达及其与骨髓瘤相关血管新生关系的研究,R733.3

中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产基础科学 > 水产生物学 > 水产动物学
© 2012 www.xueweilunwen.com