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NSA2在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型中表达的时相性和定位研究

作　者: 付鹏
导　师: 彭惠
学　校: 重庆医科大学
专　业: 眼科学
关键词: NSA2 脉络膜新生血管年龄相关性黄斑变性
分类号: R318.51
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：（1）建立小鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）动物模型；（2）采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光染色技术对NSA2（Nop seven-associated2）在C57BL/6J小鼠CNV动物模型眼组织中的表达情况进行研究，以期为探讨湿性AMD的发病机制提供新的实验依据和理论依据。方法：（1）采用532nm氩激光诱导C57BL/6J小鼠CNV动物模型；（2）取光凝后14d组小鼠眼做脉络膜铺片，用CD31抗体标记血管内皮细胞的方法对CNV模型进行鉴定；（3）采用RT-PCR和Westernblotting方法检测正常对照组和光凝后1d、3d、5d、7d和14d组小鼠CNV中NSA2mRNA和蛋白的表达变化情况进行研究，得出光凝后不同时间点NSA2在CNV模型鼠眼组织中表达的时间变化规律；（4）取光凝后7d组小鼠眼球做冰冻切片，用免疫荧光染色方法对NSA2蛋白在CNV模型鼠眼组织中的表达进行定位研究。结果：（1）在本课题中，我们用532nm氩激光成功稳定的诱导出了C57BL/6J小鼠CNV动物模型，能满足该课题中所有实验的需要。（2）PCR结果显示NSA2mRNA在正常成年C57BL/6J小鼠视网膜-脉络膜-巩膜复合物中弱表达。视网膜光凝后，NSA2mRNA在CNV模型眼的视网膜-脉络膜-巩膜复合物中的表达有明显的时间变化规律，光凝后1d NSA2的表达开始上调，1~3d逐渐增强，3d达高峰，之后其表达逐渐减弱。其中，光凝后1d、3d、5d、7d组NSA2mRNA的表达明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；光凝后14d组NSA2mRNA的表达与正常对照组相比无统计学意义（P＞0.05）；光凝后3d组NSA2mRNA的表达量明显高于其余各组，差别有统计学意义（P＜0.05）。（3）Western blot结果显示，NSA2蛋白在正常成年C57BL/6J小鼠视网膜-脉络膜-巩膜复合物中呈弱表达。光凝后1dNSA2蛋白的表达开始上调，3d达高峰，之后逐渐下降，14d组NSA2蛋白的表达与正常组相比仍有明显差异（P＜0.05）；光凝后3d组和5d组NSA2蛋白的表达量明显高于其余各组，差异明显（P＜0.05），但3d组和5d组组间比较，未见明显差异（P＞0.05）。（4）免疫荧光染色结果显示NSA2蛋白在正常小鼠视网膜外丛状层有较强表达；在光凝后7d组CNV模型鼠眼组织中，除了在视网膜外丛状层中NSA2蛋白呈高表达外，在组织增生活跃的CNV形成区域也可检测到较强的NSA2蛋白表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：NSA2在CNV形成早期表达上调，具有明显的时间变化规律，且在CNV区域有较强的表达，因此我们推断NSA2可能在CNV形成这一病理过程中起着重要作用。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-8
摘要  8-10
ABSTRACT  10-12
前言  12-14
1 材料与方法  14-25
  1.1 材料  14-16
  1.2 方法  16-25
2 结果  25-29
  2.1 CNV 模型检测结果  25
  2.2 RT-PCR 结果  25-27
  2.3 Western Blot 结果  27-28
  2.4 免疫荧光染色结果  28-29
3 讨论  29-32
全文总结  32-33
参考文献  33-35
文献综述  35-45
  参考文献  42-45
致谢  45-46
攻读硕士学位期间发表的文章  46-47

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