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脂肪源性干细胞在温度敏感性支架材料上培养特性的实验研究

作　者: 韦巧玲
导　师: 徐建江
学　校: 复旦大学
专　业: 眼科学
关键词: 组织工程眼表重建脂肪源干细胞口腔粘膜上皮细胞细胞层片技术
分类号: R318.0
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

脂肪源性干细胞在温度敏感性支架材料上培养特性的实验研究[目的]在温度敏感性支架材料(Temperature-responsive scaffolds, TRSs)上培养兔脂肪源性干细胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs)、兔口腔黏膜上皮细胞(Oral mucosal epithelial cells, OMECs),通过比较两种细胞体外的生长情况和生长特性,探求脂肪源干细胞作为重建眼表的种子细胞的可能性。[方法]异丙基丙烯酰胺溶于异丙醇加入35mm直径的培养皿,利用电子束照射制备温度敏感性培养皿。取兔脂肪组织及口腔黏膜上皮组织,分别消化、离心获取原代细胞,ADSCs体外培养至二代后接种于TRSs,原代OMECs直接接种于有丝裂霉素C处理过的有鼠3T3生长的TRSs中,比较两种细胞的形态、生长速度、细胞层片脱附时间、层片细胞计数、层片HE染色、细胞免疫组化染色(角蛋白CK12及干细胞标志物p63、ABCG2)及其扫描电镜检查。[结果]二代ADSCs细胞呈长梭形编织状,局部呈漩涡状排列,细胞形态单一,活性强。原代OMECs呈不规则圆形、折光性强,完全伸展的细胞呈扁平的卵圆形,胞核清晰。二代ADSCs覆盖率达100%所需的生长周期为12-14天,层片脱附时间为(46±9.6)min,细胞总计数为(7.9±1.1)×105个/片；而原代OMECs所需生长周期为14-16天,层片脱附时间为(91.9±10.9)min,计数为(45.8±26.5)×105个/片,两者脱附时间及细胞总计数具有统计学差别。HE染色示ADSCs细胞核呈1-3层排列,而OMECs细胞核呈4-5层覆层结构。两者角蛋白CK12及干细胞标志物P63、ABCG2均呈阳性。扫描电镜可见两者细胞均具有上皮典型微绒毛、细胞间连接紧密。[结论]通过在TRSs上培养获取的ADSCs层片可作为眼表重建的新种子来源。

全文目录

中英文缩写一览表  3-5
中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
前言  7-10
  技术路线  9-10
第一部分温度敏感性支架材料研制的实验研究  10-19
  材料与方法  12-15
  结果  15-18
  讨论  18-19
第二部分脂肪源干细胞在温度敏感性材料上培养特性的实验研究  19-34
  材料与方法  20-25
  结果  25-32
  讨论  32-34
参考文献  34-35
发表及已录用待发表论文  35-36
综述  36-45
  参考文献  42-45
致谢  45-46

脂肪源性干细胞在温度敏感性支架材料上培养特性的实验研究

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