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Caveolae对血管平滑肌细胞CLR膜分布的影响

作　者: 唐江琼
导　师: 秦旭平
学　校: 南华大学
专　业: 药理学
关键词: 降钙素基因相关肽降钙素受体样受体小凹蛋白-1 血管平滑肌细胞小凹结构
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：已经证实细胞膜小凹结构（Caveolae）是许多信号分子、激酶以及多数受体在细胞膜的聚集区。降钙素受体样受体（CLR）是降钙素基因相关肽（CGRP）受体的主要成分蛋白，其在膜上分布的多少决定了CGRP对细胞的作用强弱。本研究旨在探索CLR膜分布的变化是否与Caveolae有关联，并进一步探索Caveolae的标记蛋白Caveolin-1与CLR是否存在相互作用。方法：用含10%FBS的DMEM培养基培养鼠源性的血管平滑肌细胞株A10，0.1%FBS的培养基同步化细胞24h，用CGRP，β-环糊精（β-cyclodextrin,β-CD）等因素按实验分组处理；RT-PCR法检测CLR mRNA的含量；蛋白印迹法检测CLR蛋白水平；免疫共沉淀法检测CLR和caveolin-1的相互作用；免疫荧光法、激光共聚焦法检测CLR和caveolin-1的亚细胞共定位情况。结果：①CGRP能时间依赖性地减少CLR在血管平滑肌细胞A10细胞膜上的分布，在4小时左右降低幅度最大，之后细胞膜上CLR蛋白水平变化不大，进入平台期，而CGRP受体拮抗剂CGRP8-37能阻断CGRP的此效应。②β-CD，一种能破坏细胞膜上小凹结构的试剂，能拮抗CGRP刺激引起的细胞膜上CLR的减少。值得关注的是，β-CD处理组细胞后，CLR总蛋白、CLR mRNA表达没有明显的差别(P>0.05)，所以CLR蛋白的膜/浆比值减低，因此我们推测小凹结构的完整性可能对CLR应答CGRP的效应起着重要的作用。③免疫共沉淀实验检测发现，小凹的标志蛋白caveolin-1与CLR存在相互作用，CGRP处理组与0.1%FBS对照组相比，CGRP处理组免疫复合物的结合减弱。④免疫荧光和激光共聚焦法结果显示，caveolin-1与CLR主要共定位细胞膜。结论：Caveolae结构的完整性对CLR的膜分布有影响，主要表现在破坏Caveolae结构能降低CLR膜分布，这种作用可能与CLR/caveolin-1复合物在细胞膜上的相互作用有关。

全文目录

主要英文缩略语索引  4-5
摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-11
实验材料  11-15
  主要仪器  12-13
  主要试剂配制  13-15
实验方法  15-19
实验结果  19-28
讨论  28-32
结论  32-33
参考文献  33-36
文献综述：降钙素基因相关肽受体组分蛋白研究进展  36-44
  参考文献  41-44
成果目录  44-45
致谢  45-46
致谢资助基金  46

Caveolae对血管平滑肌细胞CLR膜分布的影响

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