学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

重组sCT-CGRP基因转生菜体系的建立及表达的研究

作　者: 梁利恒
导　师: 余琼
学　校: 黑龙江大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 鲑鱼降钙素 人α降钙素基因相关肽 生菜
分类号: S636.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 18次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


心血管疾病与骨质疏松症正威胁着人类的生命健康,尤其给老年人的生活带来严重影响。目前治疗两种疾病的有效药物分别是降钙素基因相关肽(hαCGRP)和鲑鱼降钙素(sCT),但目前临床用hαCGRP与sCT主要是通过组织提取或化学合成的方法获得,存在来源有限和价格昂贵等问题。本课题为了满足同时预防和治疗心血管疾病与骨质疏松症的要求,应用基因工程技术对重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽(msCT-hαCGRP)融合基因进行了研究,并已成功将msCT-hαCGRP融合基因整合到植物双元表达载体中。研究拟利用生菜作为表达系统来表达该融合基因。选择美国大速生生菜品种,通过对再生体系的优化,获得最优再生条件:8%次氯酸钠对种子消毒灭菌30 min,播种于1/2 MS无菌培养基,取苗天数7 d,子叶柄为受体材料,正面朝上接入不定芽分化培养基。利用本实验室构建的重组基因工程菌株pBI AMV/hαCGRP/msCT EHA105,通过对遗传转化体系的优化,获得最佳转化条件:筛选分化培养基中Cefx浓度500 mg/L,Kan浓度25 mg/L,转化过程预培养2 d,菌液浓度OD600值0.1,侵染时间5 min。选择10株转基因抗性生菜进行扩大繁殖,对后代植株提取基因组DNA进行PCR检测,发现有8株表现为阳性,转基因阳性率为80%。选择一株阳性植株提取融合基因进行DNA序列测定,结果表明已成功将msCT-hαCGRP融合基因导入生菜基因组中,获得了具有保健和药用功能的生菜新品种。最终期望通过直接食用或提取融合表达产物来达到预防和治疗心血管疾病与骨质疏松症的目的。

全文目录


中文摘要  3-4
Abstract  4-9
第1章 绪论  9-31
  1.1 降钙素的概述  9-14
    1.1.1 降钙素的介绍  9-10
    1.1.2 适应症  10-11
    1.1.3 降钙素制备的研究现状  11-14
  1.2 降钙素基因相关肽的概述  14-19
    1.2.1 降钙素基因相关肽的介绍  14-15
    1.2.2 适应症  15-17
    1.2.3 降钙素基因相关肽制备的研究现状  17-19
  1.3 融合蛋白的概述  19-24
    1.3.1 融合蛋白的简介  19-22
    1.3.2 融合蛋白技术的研究内容  22-23
    1.3.3 鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合蛋白的介绍  23-24
  1.4 生物反应器生产外源蛋白  24-28
    1.4.1 生物反应器的种类  24-26
    1.4.2 生菜生物反应器制备外源药用蛋白的研究进展  26-28
  1.5 本课题的研究意义及主要内容  28-31
    1.5.1 本课题的研究意义  28-29
    1.5.2 主要内容  29-31
第2章 材料和方法  31-47
  2.1 实验材料  31-36
    2.1.1 植物材料  31
    2.1.2 菌株  31
    2.1.3 主要仪器  31-32
    2.1.4 主要试剂  32
    2.1.5 试剂的配置  32-35
    2.1.6 培养基的配置  35-36
  2.2 实验方法  36-47
    2.2.1 农杆菌的培养  36-38
    2.2.2 生菜组织培养再生体系的优化  38-39
    2.2.3 生菜遗传转化体系的优化  39-42
    2.2.4 转化再生植株的移栽及扩大繁殖  42-43
    2.2.5 转融合基因植株的分子检测  43-47
第3章 结果与讨论  47-77
  3.1 农杆菌的培养  47-49
    3.1.1 农杆菌生长曲线的测定  47-48
    3.1.2 菌液浓度梯度的选择  48-49
  3.2 生菜组织培养再生体系的确立  49-56
    3.2.1 生菜无菌苗的获得  49-51
    3.2.2 取苗天数对再生率的影响  51-52
    3.2.3 受体材料对再生率的影响  52-53
    3.2.4 接入方式对再生率的影响  53-55
    3.2.5 再生苗的生根  55-56
  3.3 生菜遗传转化体系的建立  56-69
    3.3.1 筛选条件的选择  56-63
    3.3.2 侵染条件的选择  63-69
  3.4 转化再生植株的获得  69-73
    3.4.1 转化植株的再生及生根  69-70
    3.4.2 转化植株的扩大繁殖及移栽  70-73
  3.5 转融合基因植株的分子检测  73-77
    3.5.1 转融合基因植株的 PCR 检测  73-75
    3.5.2 PCR 产物的序列测定  75-77
结论  77-78
参考文献  78-89
附录  89-93
致谢  93-94
攻读学位期间发表论文  94

相似论文

  1. 不同光质和营养液组成对生菜生长和烧边发生的影响,S636.2
  2. 鲑鱼降钙素治疗绝经后骨质疏松症的临床观察,R580
  3. 高产优质生菜气雾栽培系统中营养液调控技术的研究,S636.2
  4. 鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂的研究,R94
  5. 新型立体式无土栽培装置的研制及在生菜上栽培技术的研究,S626
  6. 鲑鱼降钙素基因在大肠杆菌中的表达纯化及药理活性研究,R96
  7. 纳米包装材料对鲜切西兰花、生菜的保鲜作用研究,TS255.3
  8. 作物对外源硒的吸收效果及外源硒对作物生物量的影响研究,S143
  9. 沼液作为生菜、柑橘叶面肥的试验研究,S666
  10. 拟南芥GDPMPPASE和GALPPASE基因转化生菜研究,S636.2
  11. 滇池流域农田生态系统氮磷分布及其循环研究,S181
  12. 结球生菜冷链物流保鲜技术研究,S636.2
  13. 生菜遗传转化体系的建立及禽流感抗原基因NA和HA的导入,S636.3
  14. 葡甘聚糖/生物高分子复合膜及其在鲜切生菜上的应用,TS255.1
  15. 番茄和生菜的施硒效应和积硒特性,S636.2
  16. 蚯蚓粪复合基质的原料配比研究及其对生菜和观赏番茄生长的影响,S641.2
  17. 复合重金属对土壤酶活性及生菜富集量影响研究,X53
  18. 水培生菜生长发育模型的建立,S636.2
  19. 沼液沼渣在蔬菜无土栽培中的应用研究,S626
  20. 水分胁迫对生菜生理生化及气孔参数的影响,S636.2

中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 绿叶菜类 > 莴苣（生菜）
© 2012 www.xueweilunwen.com