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基于磁性与荧光纳米粒的生物分析新方法研究

作　者: 张斌
导　师: 谢洪平
学　校: 苏州大学
专　业: 药物分析学
关键词: 磁性纳米粒量子点层层自组装复合纳米粒免疫分析
分类号: R917
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

本文就CdTe与CdTe/CdS两种量子点的荧光复合纳米粒的制备与性能、磁性纳米粒的制备及表面羧基化、两种量子点荧光复合纳米粒和羧基化磁性纳米粒在乙肝e抗原（HBeAg）和乙肝表面抗原（HBsAg）同时检测中的应用作了相关研究。采用St ber法制备了平均粒径为60nm的二氧化硅纳米粒，该纳米粒具有较好的水溶性和单分散性，通过静电层层自组装在其表面依次包覆阳离子聚电解质聚二烯丙基二甲基氯化铵（PDAC）、CdTe或CdTe/CdS量子点、PDAC和阴离子聚电解质聚丙烯酸（PAA），分别制得两种颜色的量子点荧光复合纳米粒，并对量子点的吸附过程进行了优化。采用荧光分光光度计、透射电子显微镜（TEM）、Zeta电位仪对复合纳米粒的形态和性能进行了表征，结果表明，两种荧光复合纳米粒具有较强的荧光与较好的水溶性，且泄漏率低，光漂白弱，荧光具有较好的时间稳定性及一定的酸、碱、抗氧化稳定性。同时纳米粒表面富含的大量羧基，可与生物分子连接，为双抗原同时检测提供了荧光标记物。采用共沉淀法制备了超顺磁性Fe₃O₄纳米粒，并分别以静电层层自组装与表面聚合两种方式对纳米粒进行了表面羧基化修饰。采用红外光谱、X射线多晶衍射、TEM、Zeta电位仪、粒径分布对纳米粒的形态、组成和性能进行了表征。两种羧基化方式均明显改善了磁性纳米粒的分散性，对Fe₃O₄的结晶性也没有明显影响，同时通过表面羧基与生物分子的连接，磁性纳米粒可用作免疫检测的磁性标记物。采用碳二亚胺共价交联法活化，分别优化了两种荧光复合纳米粒及羧基化磁性纳米粒与相应抗体的连接条件，比较了两种羧基化磁性纳米粒与抗体的连接能力。以荧光复合纳米粒标记的羊抗抗体（CdTe复合纳米粒与羊抗HBeAg抗体连接；CdTe/CdS复合纳米粒与羊抗HBsAg抗体连接）为检测探针，以磁性纳米粒标记的小鼠抗抗体（小鼠抗HBeAg抗体和小鼠抗HBsAg抗体）为捕获探针，采用双抗体免疫夹心的剩余荧光法，分别建立了HBeAg和HBsAg的定量检测方法，线性范围均为20.0-100.0ng/mL，线性相关系数R2分别达0.9958和0.9972，两种检测体系均具有良好的准确度和精密度。抗体的交叉反应性与体系的选择性实验表明构建HBeAg和HBsAg的同时定量检测体系的可行性，对空白血浆的加样回收测定结果表明，本文建立的HBeAg和HBsAg的同时定量检测方法具有简单、快速、灵敏和同时检测等优点，有望应用于临床中乙型病毒性肝炎疾病的检测。

基于磁性与荧光纳米粒的生物分析新方法研究

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