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基于液相色谱—质谱联用技术的紫杉醇分析方法及其临床应用的研究

作　者: 钱隽
导　师: 郁韵秋
学　校: 复旦大学
专　业: 药物分析学
关键词: 紫杉醇 LC-MS LC-MS/MS 人血浆 药代动力学
分类号: R917
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


紫杉醇是临床上常用的紫杉烷类抗癌药物。然而,紫杉烷类药物具有强疏水性,临床使用时需用多种药用溶媒增溶,使药物的疗效和安全性受到影响。开发高效低毒的紫杉醇新型制剂已成为近年来国内外研究的热点,由此也引发了对于紫杉醇在定性、定量测定以及代谢物分析等方面的各种需求。本课题分别以液相色谱-质谱联用(LC-MS)和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)为技术平台,对人血浆中紫杉醇的分析方法进行了研究。经方法优化,建立了灵敏度高、特异性好的定量分析方法,并进行了方法验证。LC-MS法采用液液萃取法进行血浆样品预处理,提取液为叔丁基甲醚,内标选用炔诺酮。色谱柱为Zorbax SB-C18柱(100mm×2.1mm,3.5μm, Agilent),流动相为甲醇-0.2mmol/L甲酸铵溶液(包含0.1%甲酸),梯度洗脱。在ESI源正离子模式下,选择离子监测(SIM)的目标离子为紫杉醇的[M+Na]+m/z876.5和内标的[M+H]+m/z299.4。方法学验证表明本方法的灵敏度高、特异性好,线性范围是1.0-400ng/mL(r>0.998),最低定量限为1.0ng/mL,无明显基质效应,方法的日内和日间精密度都小于8.8%,准确度在±6.8%以内,可以满足药代动力学研究的要求。此方法已成功应用于紫杉醇脂质体注射液在患者体内的药动学研究。LC-MS/MS法定量方法中内标选用多西紫杉醇,色谱柱为Shimpack XR-ODS柱(75mm x3.0mm,2.2μm, Shimadzu),流动相为甲醇：1.0mmol/L甲酸铵溶液(73/27,v/v),等度洗脱。在ESI源正离子模式下,多反应监测(MRM)的离子对为紫杉醇m/z854.2→286.1和内标m/z808.2→226.0。线性范围是0.5-500ng/mL,方法的日内和日间精密度都小于7.5%,准确度在±3.6%以内。该方法血浆用量少(50μL),灵敏度高,最低定量限达0.5ng/mL,分析周期为4min,适用于快速以及大样本量的分析,并在注射用紫杉醇聚合物胶束的一期临床试验中取得满意的结果。研究中对色谱和质谱条件进行了细致优化,并且通过在溶液中加入不同的添加剂研究紫杉醇的离子化方式以及加合物离子的形成,有助于提高紫杉醇的离子化效率和质谱响应的稳定性,满足痕量测定的需求。通过系统研究紫杉醇在电喷雾一级质谱的电离规律和二级质谱的裂解规律,总结出紫杉醇质谱行为的特点,阐明了紫杉醇的裂解过程及特征性碎片离子,并推测受试者体内主要代谢产物的结构和可能的代谢途径,从而为定性鉴别和定量分析提供可靠的理论依据,为其药物代谢过程的研究奠定基础。

全文目录


摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
第一章 基于LC-MS法定量分析人血浆中的紫杉醇  12-24
  1 引言  12-13
  2 实验部分  13-15
    2.1 仪器  13
    2.2 药品与试剂  13
    2.3 标准溶液与质控样品的配制  13-14
    2.4 浆样品预处理  14
    2.5 色谱条件  14-15
    2.6 质谱条件  15
  3 结果与讨论  15-22
    3.1 质谱条件的优化  15-16
    3.2 色谱条件的优化  16-17
    3.3 样品预处理方法的选择  17
    3.4 LC-MS法定量分析人血浆中紫杉醇的方法学验证  17-20
      3.4.1 特异性  17-18
      3.4.2 线性范围和定量下限  18
      3.4.3 精密度与准确度  18-19
      3.4.4 基质效应与提取回收率  19
      3.4.5 稳定性  19-20
      3.4.6 稀释试验  20
    3.5 LC-MS分析方法在临床试验中的应用  20-22
  4 本章小结  22-24
第二章 基于LC-MS/MS法分析人血浆中的紫杉醇  24-54
  1 引言  24-25
  2 实验部分  25-29
    2.1 仪器  25
    2.2 药品与试剂  25
    2.3 标准溶液与质控样品的配制  25-27
    2.4 标准溶液的质谱直接进样分析  27-28
    2.5 标准溶液的LC-MS/MS分析  28
    2.6 人血浆中紫杉醇的LC-MS/MS定量分析  28
    2.7 人血浆中紫杉醇代谢物的液相色谱-质谱联用分析  28-29
  3 结果与讨论  29-48
    3.1 标准溶液直接进样的ESI-MS和ESI-MS/MS分析  29-35
      3.1.1 一级质谱研究  29-32
      3.1.2 级质谱研究  32-35
    3.2 标准溶液色谱进样的LC-ESI-MS/MS分析  35-40
      3.2.1 流动相的比例优化  35-38
      3.2.2 流动相中的添加剂对紫杉醇离子化的影响  38-40
      3.2.3 离子对的选择  40
    3.3 LC-MS/MS法定量分析人血浆中紫杉醇的方法学验证  40-44
      3.3.1 特异性  40-41
      3.3.2 线性范围和定量下限  41
      3.3.3 精密度与准确度  41-43
      3.3.4 基质效应与提取回收率  43
      3.3.5 稳定性  43-44
      3.3.6 稀释试验  44
    3.4 LC-MS/MS分析方法在临床试验中的应用  44-48
      3.4.1 受试者血样中紫杉醇的浓度测定  44-45
      3.4.2 临床药代动力学研究  45-46
      3.4.3 代谢物研究  46-48
  4 本章小结  48-50
  参考文献  50-54
第三章 综述：流动相中的添加剂对LC-ESI/MS离子化的影响  54-69
  1. 引言  54
  2. 电喷雾离子化的过程  54-55
  3. 流动相中的添加剂  55-61
    3.1. pH  56-57
    3.2. 添加剂的浓度  57-58
    3.3. 离子对试剂  58
    3.4. 加合物的形成  58-60
    3.5. 加合物形成对紫杉烷类定量分析的影响  60-61
  参考文献  61-69
附录 攻读硕士学位期间以第一作者撰写的论文  69-70
致谢  70-71

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药物分析
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