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耐力游泳运动对高脂膳食诱导大鼠NASH形成过程中肝细胞凋亡的影响

作　者: 刘绍生
导　师: 何玉秀
学　校: 河北师范大学
专　业: 运动人体科学
关键词: 运动高脂喂养凋亡炎症 NASH
分类号: G804.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

NAFLD是主要的现代文明病之一，严重危害人体健康。全球NAFLD的发病率约为20~30%，并且增长迅速，目前已成为全球最普遍的肝脏疾病。在NASH的形成过程中，肝细胞凋亡起着重要的作用，且肝细胞的凋亡水平和肝组织的炎症程度有着密切的关系。所以，通过各种手段来降低肝细胞的凋亡水平，可以改善肝组织的炎症反应，延缓或阻止NASH的进程。研究目的：观察耐力游泳运动对高脂膳食诱导大鼠NASH形成过程中大鼠血清FFA、TNF-α及肝组织凋亡相关蛋白的表达，探讨运动在预防NASH形成过程中对肝细胞凋亡与肝细胞炎症的影响规律，为运动预防和改善NASH提供一定的理论依据。研究方法：Sprague-Dawley（SD）纯系4周龄雄性大鼠84只，按膳食方式不同分为两大组：普通膳食喂养组（普通组）和高脂膳食喂养组（高脂组）。两组按是否有运动干预又分为安静组和运动组两个亚组，共计4个亚组，分别为普通膳食安静组（C组）、普通膳食运动组（E组）、高脂膳食安静组（H组）、高脂膳食运动组（HE组）。各组大鼠取材时间为实验4周、8周和12周。制备肝组织常规石蜡切片进行肝细胞脂肪变性等级与炎症程度评分；Western Blot方法测定肝脏Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达；流式细胞术检测肝细胞凋亡率。研究结果：（1）日平均摄入热量：各实验阶段，日平均摄入热量H组均高于C组（P＜0.01），E组均低于C组（P＜0.01），HE组均高于E组（P＜0.01），HE组均低于H组（P＜0.01）。（2）体重与肝重：实验4周和12周阶段，体重H组均高于C组（P＜0.01）；实验8周和12周时，E组均低于C组（P＜0.05），HE组均低于H组（P＜0.05）。各实验阶段大鼠肝重H组均高于C组（P＜0.01），HE组均高于E组（P＜0.01），且HE12组低于H12组（P＜0.05）。（3）血清学指标：各实验阶段，血清FFA浓度H组均高于C组（P＜0.05），HE组均低于H组（P＜0.05）；实验8周和12周阶段，E组均低于C组（P＜0.01），且HE12组低于H12组（P＜0.01）。血清ALT仅H12组高于C12组（P＜0.01）。血清TNF-α水平结果为H12组高于C12组（P＜0.01），HE12组低于H12组（P＜0.05）。（4）肝细胞凋亡率：各实验阶段，肝细胞凋亡率H组均高于C组（P＜0.05）；运动能使高脂膳食大鼠凋亡率下降，且HE12组低于H12组（P＜0.01）。（5）肝组织凋亡相关蛋白：肝脏Caspase-3与Bax蛋白表达均表现为H8组高于C8组（P＜0.05）；H12组高于C12组（P＜0.01），HE12组高于E12组（P＜0.01），E12组低于C12组（P＜0.05），HE12组低于H12组（P＜0.01）。肝脏Bcl-2蛋白表达H4组低于C4组（P＜0.05），HE4组低于E4组（P＜0.05）；H8组低于C8组（P＜0.01），HE8组低于H8组（P＜0.01）； H12组低于C12组（P＜0.01），E12组高于C12组（P＜0.05），HE12组高于H12组（P＜0.01），HE12组低于E12组（P＜0.01）。（6）肝细胞脂肪变性与肝细胞炎症活动度评分：肝细胞脂肪变性结果显示，各实验阶段H组均高于C组（P＜0.01），HE组均高于E组（P＜0.01），H组均高于HE组（P＜0.01），其中H12组高于HE12组（P=0.068）。各实验阶段肝组织炎症活动度评分C组均低于H组（P＜0.01），其中HE8组低于H8组（P=0.055），HE12组低于H12组（P＜0.01）。结论：1．12周的高脂膳食可以成功复制大鼠NASH模型，其机制可能是高脂膳食导致了大鼠血清FFA增高引起肝细胞脂质化，并促进肝细胞凋亡和肝组织发生炎症反应；2．耐力游泳运动能有效缓解高脂膳食大鼠NASH的发展和改善NASH的症状，其机制可能是通过限制热量的摄入、降低血FFA、减少肝细胞对脂质的积累，同时抑制肝细胞凋亡从而延缓NASH的进程并减轻肝组织炎症活动；3．在高脂膳食诱导的NASH形成过程中，肝细胞凋亡可能是促使肝脏单纯脂肪变性发展成为NASH的一个重要原因。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-11
引言  11-13
1 文献综述  13-21
  1.1 NASH 的发病机制  13
  1.2 细胞凋亡概述  13-15
  1.3 肝细胞凋亡与 NASH  15
  1.4 脂代谢与肝细胞凋亡  15-18
    1.4.1 FFA 与肝细胞凋亡  16
    1.4.2 TNF-α与肝细胞凋亡  16-17
    1.4.3 血糖变化与肝细胞凋亡  17
    1.4.4 IR 与肝细胞凋亡  17-18
    1.4.5 肥胖肝细胞凋亡  18
  1.5 运动与 NASH  18-19
  1.6 运动与肝细胞凋亡  19
  1.7 小结  19-21
2 实验对象与方法  21-25
  2.1 实验动物及分组  21
  2.2 动物喂养与运动方案  21-22
  2.3 取材及样本处理  22
  2.4 观察指标及测试方法  22-23
    2.4.1 组织病理学指标  22-23
    2.4.2 一般指标  23
    2.4.3 血清学指标  23
    2.4.4 肝脏蛋白指标  23
    2.4.5 肝细胞凋亡率检测  23
  2.5 主要实验试剂（见附录 5）  23
  2.6 主要实验仪器（见附录 6）  23
  2.7 统计学处理  23-25
3 实验结果  25-57
  3.1 组织学指标  25-31
    3.1.1 不同实验阶段各组实验大鼠肝脏的形态学变化  25
    3.1.2 不同实验阶段各组大鼠肝脏组织学观察  25-27
    3.1.3 不同实验阶段各组大鼠肝组织脂肪变性分级  27-29
    3.1.4 不同阶段各组大鼠肝组织炎症活动度评分  29-31
  3.2 一般指标  31-40
    3.2.1 不同实验阶段各组大鼠日平均摄食量与日平均摄入热量变化  31-35
    3.2.2 不同阶段各组大鼠的体重变化  35-37
    3.2.3 不同阶段各组大鼠肝重与肝脏指数的变化  37-40
  3.3 血液指标  40-47
    3.3.1 不同阶段各组大鼠血清 TNF-α的变化  40-42
    3.3.2 不同阶段各组大鼠血清 FFA 的变化  42-44
    3.3.3 各组大鼠血清 ALT 与 AST 的变化  44-47
  3.4 肝细胞凋亡率检测  47-49
  3.5 肝组织蛋白检测  49-57
    3.5.1 各组大鼠肝组织 Caspase-3 蛋白的表达量的变化  49-51
    3.5.2 不同阶段各组大鼠肝组织 Bcl-2 蛋白与 Bax 蛋白表达的变化  51-54
    3.5.3 不同阶段各组大鼠肝组织 Bcl-2 /Bax 比值的变化  54-57
4 分析与讨论  57-63
  4.1 12 周高脂膳食对大鼠 NASH 形成的影响  57
  4.2 高脂膳食诱导大鼠 NASH 形成的可能机制  57-59
    4.2.1 高脂膳食增加大鼠热量摄入导致肥胖  57-58
    4.2.2 高脂膳食升高大鼠血清 FFA 水平引起脂代谢紊乱  58
    4.2.3 高脂膳食促进肝细胞凋亡并引发肝组织炎症  58-59
  4.3 运动对高脂膳食大鼠肝细胞脂肪变性及肝组织炎症的影响  59-61
    4.3.1 运动能抑制高脂膳食大鼠的热量摄入并控制体重  59-60
    4.3.2 运动降低高脂膳食大鼠血清 FFA 改善脂质代谢  60
    4.3.3 运动抑制高脂膳食大鼠肝细胞凋亡并减缓 NASH 形成  60-61
  4.4 高脂膳食诱导大鼠 NASH 形成过种中肝细胞凋亡与肝组织炎症的关系  61-62
  4.5 运动预防高脂膳食诱导大鼠 NASH 形成效果  62
  4.6 建议  62-63
结论  63-64
参考文献  64-72
致谢  72-73
攻读学位期间取得的科研成果清单  73-74
附录  74-79
  附录 1 缩略词表  74-75
  附录 2 肝组织炎症活动度评分方案  75-76
  附录 3 Wetern-blot 测定蛋白表达的具体方法  76-77
  附录 4 流式细胞术检测肝细胞凋亡率的具体操作方法  77-78
  附录 5 主要实验试剂清单  78-79
  附录 6 主要实验仪器清单  79

耐力游泳运动对高脂膳食诱导大鼠NASH形成过程中肝细胞凋亡的影响

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