学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
p300通过激活RASSF2基因表达诱导胃癌细胞HGC-27细胞周期S/G2阻滞的分子机制
作 者: 潘云慧
导 师: 李晓雪
学 校: 东北师范大学
专 业: 遗传学
关键词: RASSF2 p300 S/G2细胞周期停滞 DNA去甲基化 组蛋白乙酰化
分类号: R735.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 35次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
抑癌基因RASSF2由于启动子处DNA超甲基化而导致的基因沉默与胃癌的发生和发展密切相关。有研究发现,组蛋白乙酰转移酶p300能够激活胃癌细胞SGC-7901细胞中RASSF2基因的表达并诱导细胞晚期凋亡,从而抑制细胞增殖。已知,RASSF2基因对细胞增殖的抑制机制包括细胞凋亡和细胞周期停滞两种途径。而p300激活RASSF2对胃癌细胞周期的影响及作用机制目前还未见报道。本论文中,我们通过集落形成实验发现p300能够抑制胃癌细胞HGC-27的增殖,而该抑制作用可以被RASSF2的干涉质粒部分逆转。Western Blot检测和RT-PCR结果证实,p300激活了HGC-27细胞中RASSF2基因的表达。这说明,在HGC-27细胞中,p300通过激活RASSF2抑制细胞增殖。流式细胞术结果显示,过表达p300或抑制RASSF2表达都能诱导HGC-27细胞中S期细胞数明显增加,而G2/M期细胞数明显下降。而共转染p300过表达质粒与RASSF2 siRNA质粒时,S期以及G2/M期的细胞数都恢复到了与对照组相近的水平。Western Blot结果表明,p300激活RASSF2基因表达能够促进HGC-27细胞中p21的表达,以及磷酸化pRb对未被磷酸化pRb蛋白表达的比例。同时p300激活RASSF2基因导致磷酸化p38蛋白表达水平的下降。以上结果说明,p300通过激活RASSF2影响了HGC-27细胞周期相关因子的表达水平,诱导S/G2细胞周期停滞。另外,染色质免疫沉淀(ChIP)实验结果表明,p300通过HAT活性提高了RASSF2启动子处Sp1结合位点以及CpG岛的组蛋白H3和H4的乙酰化水平。同时,MSP和BSP的结果表明,p300激活RASSF2基因转录与RASSF2基因启动子CpG岛的DNA去甲基化相关。这说明,组蛋白乙酰化修饰和DNA去甲基化都在p300激活RASSF2基因转录过程中发挥重要作用。
|
全文目录
中文摘要 4-5 英文摘要 5-8 第一部分 研究背景 8-17 一、RASSF2 基因与肿瘤 8-10 (一) RASSF 基因家族 8-9 (二) 抑癌基因RASSF2 9-10 (三) RASSF2 基因甲基化与肿瘤 10 二、组蛋白乙酰化修饰酶p300/CBP 与肿瘤 10-15 (一) 组蛋白乙酰化修饰 10-11 (二) p300/CBP 结构和功能 11-15 三、组蛋白乙酰化修饰与DNA 甲基化的关系 15-16 四、本论文的研究内容和意义 16-17 (一) 立题依据 16 (二) 本文的研究内容和意义 16-17 第二部分 实验材料与方法 17-30 一、实验材料 17 (一) 质粒 17 (二) 蛋白质和抗体 17 (三) 哺乳动物细胞系 17 (四) 试剂 17 二、实验方法 17-30 Ⅰ. 分子生物学试验方法 17-26 (一) 分子克隆技术 17 (二) DNA 琼脂糖电泳 17 (三) 质粒的大量制备 17-19 (四) 哺乳动物细胞总DNA 的提取 19-20 (五) 哺乳动物细胞总RNA 的提取 20-21 (六) 逆转录(Reverse Transcription,RT) 21 (七) PCR 和荧光定量realtime PCR 21-23 (八) 染色质免疫沉淀(ChIP) 23-24 (九) 甲基化特异性PCR(methylation specific PCR, MSP) 24-26 (十) 亚硫酸氢钠测序法(bisulfite genomic sequencing, BSP) 26 Ⅱ. 细胞生物学实验方法 26-29 (一) 哺乳动物细胞系培养 27 (二) 脂质体瞬时转染 27 (三) 蛋白质的Western Blot 分析 27-29 (四) 流式细胞术 29 (五) 集落形成 29 Ⅲ 统计学分析 29-30 第三部分 实验结果与分析 30-36 一、p300 通过上调RASSF2 基因表达抑制HGC-27 细胞增殖 30-31 二、p300 通过上调RASSF2 表达诱导细胞周期S/G2 停滞 31 三、p300 激活RASSF2 基因活性对细胞周期调控因子表达水平的影响 31-32 四、p300 激活HGC-27 细胞RASSF2 基因转录 32-33 五、p300 提高RASSF2 启动子处组蛋白H3 和H4 的乙酰化水平 33-34 六、p300 抑制RASSF2 启动子CpG 岛的DNA 甲基化水平 34-36 第四部分 讨论 36-39 一、p300 通过激活RASSF2 诱导细胞周期S/G2 停滞的分子机制 36 二、p300 诱导细胞周期阻滞与Ras 信号通路的关系 36-37 三、p300 激活RASSF2 基因表达的表观遗传机制 37-39 主要结论和创新点 39-40 一 主要结论 39 二 主要创新点 39-40 参考文献 40-47 附录 47-48 致谢 48-49 在学期间公开发表论文及著作情况 49
|
相似论文
- 肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化的检测及去甲基化肺癌细胞生物学行为和p16基因转录的研究,R734.2
- 痴呆评估量表与事件相关电位P300对轻度认知功能障碍患者的认知功能的评价,R749.1
- 组蛋白乙酰化增强转录因子Sp1诱导的mda-7基因转录激活,R739.5
- P300脑机接口系统的范式设计及其算法研究,TP334.7
- 视觉事件相关电位P300在老年抑郁症临床特征评定中的作用,R749.41
- 汉、维吾尔族神经症患者视觉事件相关电位P300对比研究,R749.7
- 学习障碍儿童的事件相关电位P300及视觉诱发电位研究,R749.94
- 姜黄素对大鼠肺动脉高压的影响及其可能机制的研究,R285.5
- 精神分裂症多种事件相关电位的研究,R749.3
- P300和MoCA量表在诊断脑梗死后认知障碍中的价值,R743.3
- 针药结合治疗皮质下动脉硬化性白质脑病的临床观察,R277.7
- 血浆DNA分析用于非小细胞肺癌患者术后短期复发的预测,R734.2
- 贲门癌中SIRT1、p300/CBP基因的表达及其临床病理学意义的研究,R735.2
- 小鼠植入前胚胎及几种组织中IFRG15的表达差异分析,Q813
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)对延边黄牛体细胞克隆效率的影响,S823
- 电针百会、神庭对脑卒中后认知功能障碍的影响,R246
- 脑外伤者认知功能障碍与P300及P50电位变化研究,R749.1
- 额叶底部脑挫裂伤患者认知功能障碍特征及其机制的初步研究,R749.1
- p300通过组蛋白乙酰化修饰激活RASSF2基因表达并诱导胃癌细胞晚期凋亡,R735.2
- 骨关节炎关节软骨细胞Fas基因异常甲基化及蛋白表达的实验研究,R684
中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com
|