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骨痹合剂治疗膝骨性关节炎临床疗效观察及干预大鼠膝骨性关节炎模型软骨细胞凋亡机制研究

作　者: 亓峰
导　师: 王琦
学　校: 云南中医学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 骨痹合剂膝骨性关节炎临床疗效观察软骨细胞凋亡机制
分类号: R684.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：观察骨痹合剂治疗膝骨性关节炎患者的临床疗效；建立一种与人类发病过程相似的去双前肢直立联合Hulth法KOA大鼠膝骨性关节炎模型，在此模型成功的基础上，探讨骨痹合剂对该模型关节软骨细胞凋亡的影响。方法：将符合纳入标准的59例膝骨性关节炎患者，采用开放试验，即病人根据自己的意愿选择药物治疗。分别编入西药对照组、骨痹合剂组，4周为一疗程，分别在服药前、服药第2周、服药第4周、服药后12周四个节点用VAS、WOMAC、临床症状体征评分、SF-36各维度的评分，以比较和分析两组之间的差异。选择48只10日龄SD大鼠，随机分为正常对照组、去双前肢直立组、去双前肢直立联合假Hulth组、去双前肢直立联合Hulth组，共4组，每组12只。正常对照组不做任何处理，其余三组均在腹腔麻醉下行去双前肢手术造模，术后置于原母鼠饲养笼内继续哺乳饲养。去双前肢直立联合假Hulth组在手术后四个月时行假Hulth手术；去双前肢直立联合Hulth组在术后四个月时行Hulth手术。四组在第二次手术后1个月时，腹腔麻醉处死，分别取每只大鼠的膝关节，通过固定、脱钙、脱水、包埋、切片等标本制作后，进行HE染色、甲苯胺蓝染色、藏红固绿染色及免疫组化观察分析。在评价模型成功的基础上，再选择52只10日龄SD大鼠，均在腹腔麻醉下行去双前肢手术造模，术后置于原母鼠饲养笼内继续哺乳饲养；在去双前肢术后四个月时行Hulth手术，在Hulth术后1个月时随机分为空白对照组、骨痹合剂组、氨糖美辛组、生理盐水组，每组13只。骨痹合剂组按0.5ml/100g体重给予骨痹合剂灌胃；氨糖美辛组按2mg/100g体重给予氨糖美辛（溶于同体积的生理盐水里）灌胃；生理盐水组按0.5ml/100g体重给予生理盐水灌胃；空白对照组不做任何干预，连续灌胃给药4周后，麻醉处死各组大鼠，取下膝关节组织，进行HE染色、甲苯胺蓝染色、藏红固绿染色及凋亡相关蛋白免疫组化观察。结果：骨痹合剂组治疗后第2周VAS、WOMAC评分、临床症状体征评分低于治疗前（P<0.05）,SF-36躯体疼痛（BP）维度评分高于治疗前（P<0.05），其余各维度无明显变化（P>0.05）。治疗后第4周VAS、WOMAC评分、临床症状体征评分低于治疗前（P<0.05），SF-36除生理职能（RP）、精神健康（MH）、一般健康状况（GH）无明显变化外（P>0.05），其余各维度评分高于治疗前（P<0.05）。治疗后12周VAS、WOMAC评分、临床症状体征评分低于治疗前、SF-36各维度评分高于治疗前(P <0.05)；对照组治疗后2周VAS、WOMAC评分、临床症状体征评分低于治疗前（P<0.05）, SF-36躯体疼痛（BP）维度评分高于治疗前（P<0.05），其余各维度无明显变化（P>0.05）。治疗后4周VAS、WOMAC评分、临床症状体征评分低于治疗前（P<0.05），SF-36除生理职能（RP）、和情感职能（RE）、精力（VT）外其余各维度评分高于治疗治疗前（P<0.05），治疗12周VAS、WOMAC评分、临床症状体征评分低于治疗前（P<0.05），SF-36评分除精力（VT）、情感职能（RE）外，其余各维度评分高于治疗前（P<0.05）；组织形态学观察正常对照组HE染色、甲苯胺蓝染色、藏红固绿染色显示关节软骨表层光滑、平整，软骨细胞分布均匀，排列整齐，各层次清晰。去双前肢直立组、去双前肢联合假Hulth组、去双前肢直立联合Hulth组显示关节面软骨表层溃疡或裂隙，甚至出现局部缺损，软骨细胞数量明显减少，软骨层染色不均，局部出现失染现象；关节各层软骨细胞出现簇集样生长，深层可见肥大软骨细胞；尤以去双前肢直立联合Hulth组最为明显。通过各组药物干预，与正常对照组、生理盐水组比较，骨痹合剂组、氨糖美辛组的关节软骨表层较光滑、平整，关节表面较连续，软骨细胞分布较均匀，排序较整齐，各层次较清晰，无明显细胞簇集现象，潮线较完整，局部染色较均匀。结论：骨痹合剂组在提高患者生活质量和社会功能活动能力优于西药对照组。研究结果显示以骨痹合剂为主的综合疗法可改善膝骨性关节炎患者严重程度指数及生活质量,并表现出随着疗程的延长,疗效的差异性越明显。成功建立了去双前肢直立、去双前肢直立联合假Hulth、去双前肢直立联合Hulth三种模型，其中去双前肢直立联合Hulth模型膝关节退变更为典型，此模型制作简便，可重复性强，与人类直立状态膝骨性关节炎发病机制相似。骨痹合剂干预膝骨性关节炎的作用机制可能是抑制软骨细胞的凋亡从而延缓软骨组织的退变作用。

全文目录

中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
缩略词一览表  11-12
引言  12-14
第一部分骨痹合剂对膝骨性关节炎患者临床疗效观察  14-24
  摘要  14-15
  1 研究对象  15-16
    1.1 病例来源  15
    1.2 诊断标准  15-16
      1.2.1 西医诊断标准  15
      1.2.2 中医症候诊断标准  15-16
    1.3 病例纳入标准  16
    1.4 病例排除标准  16
    1.5 剔出病例标准  16
    1.6 退出脱落标准  16
    1.7 终止试验标准  16
  2 研究方法  16-18
    2.1 病例分组  16-17
    2.2 样本量的估算  17
    2.3 治疗及观察方法  17
    2.4 观测指标及方法  17-18
    2.5 统计学处理  18
  3 一般资料  18-19
    3.1 治疗前两组患者性别分布情况  18-19
    3.2 治疗前两组患者年龄分布情况  19
    3.3 治疗前两组患者病程分布情况  19
    3.4 治疗前两组患者单、双膝发病情况  19
    3.5 治疗前各评分指数情况  19
  4 研究结果  19-21
    4.1 骨痹合剂组治疗前后各指标评分比较  19-20
    4.2 西药对照组治疗前后指标评分比较  20-21
    4.3 两组患者治疗后各指标评分比较  21
  5 安全性指标观察  21
  6 小结  21-22
  7 讨论  22-23
  8 结论  23-24
第二部分骨痹合剂干预去双前肢直立联合 Hulth 法大鼠膝骨性关节炎模型软骨凋亡机制的研究  24-35
  摘要  24-25
  1 材料和方法  25-30
    1.1 实验动物与分组  25
    1.2 实验试剂及药品  25-26
    1.3 主要实验器材  26
    1.4 动物模型建立方法  26-27
      1.4.1 去双前肢大鼠模型建立  26-27
      1.4.2 去双前肢直立联合 Hulth 法大鼠 KOA 模型建立  27
    1.5 模型鉴定  27-28
      1.5.1 HE 染色（X20）  27
      1.5.2 藏紅固绿染色(X20)  27
      1.5.3 甲苯胺蓝染色(X20)  27
      1.5.4 Bcl-2 免疫组化观察  27-28
      1.5.5 bax 免疫组化观察  28
    1.6 药物干预时间和方法  28
    1.7 取材及标本制备  28
    1.8 形态学检测  28-30
      1.8.1 HE 染色  28-29
      1.8.2 藏红固绿染色  29
      1.8.3 甲苯胺蓝染色  29
      1.8.4 免疫组织化学染色  29-30
  2 结果  30-31
  3 结论  31
  4 讨论  31-34
    4.1 中药延缓和阻止软骨细胞凋亡的方式  31-33
      4.1.1 中药可影响关节软骨细胞凋亡的相关癌基因的表达  31-32
      4.1.2 中药可抑制软骨细胞分泌 NO  32-33
    4.2 骨痹合剂的方药组成及用药特点  33
    4.3 骨痹合剂组成药物的现代药理学研究  33-34
  5 展望与不足  34-35
  6 结论  35
参考文献  35-37
综述  37-43
  参考文献  42-43
附录  43-84
  附表1  43
  附表2  43-45
  附表3  45-46
  附表4  46-50
  附表5  50-84
致谢  84

骨痹合剂治疗膝骨性关节炎临床疗效观察及干预大鼠膝骨性关节炎模型软骨细胞凋亡机制研究

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