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Toll样受体4内源性配体对肝星状细胞生物学活性的影响的研究

作　者: 张哲
导　师: 郭津生
学　校: 复旦大学
专　业: 消化内科学
关键词: 肝星状细胞高迁移率族蛋白1 Toll样受体4 内源性配体
分类号: R575.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景及目的：星状细胞(Hepatic stellate cell, HSC)是纤维化发生时肝脏细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的主要来源。Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)是哺乳动物跨膜模式识别受体家族的重要成员,能识别细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)并介导炎症反应和天然免疫,此外还能识别一些损伤相关内源性配体如高迁移率族蛋白1(High mobility group box-1protein, HMGB1)。近年发现HSC具有完整的TLR4信号并对LPS具有反应性。本实验旨在探讨HMGB1对HSC TLR4信号途径的激活作用及对其细胞生物学活性的影响。方法：1.复苏培养永生化小鼠野生型(WT)、TLR4基因敲除(TLR4-/-)、MyD88基因敲除(MyD88-/-)肝星状细胞株JS1、JS2、JS3,计数并接种于细胞培养板,每种细胞分为对照组、LPS处理组(100ng/ml)、HMGB1处理组(100ng/ml)。采用荧光酶标记的转录因子NF-κB(NF-κB-luc)或AP-1(AP-1-luc)反应性报告质粒与内参质粒(R-Luc)用脂质体介导共转染三种细胞系,检测HMGBl、LPS处理后细胞NF-κB及AP-1的活性；另采用逆转录-实时定量PCR法(RT-qPCR)检测各组处理细胞单核细胞趋化蛋白(Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)的mRNA的表达；ELISA法检测细胞上清中MCP-1的蛋白分泌。2.将JS1、JS2、JS3分别接种细胞培养板并分为对照组、LPS处理组(100ng/ml)、HMGB1处理组(100ng/ml)、TGF-β1处理(10μg/ml)、TGF-β1联合HMGB1处理组、LPS联合HMGB1处理组。采用RT-qPCR检测α-SMA、Ⅰ型前胶原(Col Ⅰ)的mRNA的表达；Western blot检测α-SMA、Col Ⅰ蛋白的表达。结果：1.在LPS和HMGB1刺激下,JS1细胞的NF-κB及AP-1活性显著增高,MCP-1的细胞表达和分泌显著上调,而在JS2和JS3细胞中不能诱导出上述观测指标的显著变化。2.TGF-β1能上调三种肝星状细胞中纤维化相关蛋白Col Ⅰ及α-SMA的mRNA和蛋白表达,在JS1细胞中HMGB1与TGF-β1共同刺激能使TGF-β1诱导的Col Ⅰ及α-SMA的表达进一步上调,这一现象在JS2和JS3细胞中不显著。结论:HMGB1作为一种内源性TLR4配体能激活活化HSC的TLR4信号,促进TLR4介导的HSC的炎症表型,并可能以TLR4依赖的方式对TGF-β1诱导的HSC的纤维化发生信号产生协同促进作用。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-11
第一部分 HMGB1对肝星状细胞TLR4介导的炎症信号途径的影响  11-27
  材料和方法  11-20
  实验结果  20-26
  讨论  26-27
第二部分 HMGB1对肝星状细胞纤维化发生活性的影响  27-36
  材料和方法  27-31
  实验结果  31-35
  讨论  35-36
全文总结  36-37
参考文献  37-42
附录  42-55
  综述1：肝星状细胞的起源与功能  42-46
  综述2：HMGB1的研究进展  46-55
    参考文献  51-55
英汉缩略语名词对照表  55-56
致谢  56-57

Toll样受体4内源性配体对肝星状细胞生物学活性的影响的研究

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