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慢性鼻—鼻窦炎细菌PCR检测和传统培养对比分析

作　者: 白伟红
导　师: 鞠建宝
学　校: 青岛大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 慢性鼻-鼻窦炎聚合酶链反应细菌培养
分类号: R446.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的应用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)法检测鼻窦脓黏膜标本中5种常见需氧菌的分布,并与传统培养法比较,旨在探讨PCR法在慢性鼻.鼻窦炎(Chronic Rhinosinusitis, CRS)细菌检测中的临床应用价值,并了解CRS中的常见菌群分布。方法①收集30例CRS手术患者的鼻窦脓黏膜标本分为两份,一份标本行传统需氧菌培养及药敏试验,另一份标本置-80℃冰箱保存用于后续PCR法检测。②依据文献报道并参考同期的传统细菌培养结果,确立本次实验检测的5种实验菌。引用文献报道的细菌通用引物和5种实验菌菌种特异性引物对上述临床标本进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物,最后在紫外检测仪下观察结果并拍照。设立实验菌的标准菌株作为阳性对照,无菌双蒸水作为阴性对照。结果①传统细菌培养结果显示：30例标本中需氧菌培养的总阳性率为80.0%(24/30),主要菌种培养阳性率分别为凝固酶阴性葡萄球菌43.3%(13/30)、草绿色链球菌和干燥奈瑟菌各20.0%(6/30)、表皮葡萄球菌13.3%(4/30)、肺炎克雷伯菌10.0%(3/30)、金黄色葡萄球菌6.7%(2/30)等。②PCR检测结果显示：30例标本中细菌总阳性率为83.3%(25/30),5种实验菌的阳性率分别为表皮葡萄球菌40.0%(12/30)、肺炎克雷伯菌36.7%(11/30)、金黄色葡萄球菌23.3%(7/30)、流感嗜血杆菌10.0%(3/30),肺炎链球菌0.0%(0/30)。③两种方法检出表皮葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的阳性率经配对x2检验存在统计学差异,x2值均为6.2,P<0.05；检出金黄色葡萄球菌和流感嗜血杆菌的阳性率经配对x2检验无统计学差异,x2值分别为3.2和1-,P>0.05。以细菌培养为参考标准,PCR技术对表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌的敏感性均为100%,特异性分别为69.2%、70.4%和82.1%,一致性分别为73.3%、73.3%和83.3%。结论①与传统细菌培养法比较,PCR法是一种更敏感的检测方法,且简便快速,在CRS细菌的鉴定中具有一定的临床应用价值,有望和传统培养法相结合成为客观、全面认识CRS菌群分布的一种新途径。②两种方法检出的CRS优势菌存在一定差异,表皮葡萄球菌和肺炎克雷伯菌可能是本地区CRS细菌感染的主要菌种。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-7
引言  7-8
第一章材料与方法  8-16
  1.1 研究对象  8
  1.2 标本收集  8
  1.3 主要试剂  8-9
  1.4 主要实验仪器  9-10
  1.5 传统细菌培养方法及药敏试验  10
  1.6 PCR检测细菌方法  10-15
    1.6.1 检测菌种的确定  10
    1.6.2 目的基因特异性引物的设计  10-12
    1.6.3 标准菌株DNA的提取  12-13
    1.6.4 鼻窦脓黏膜标本细菌DNA的提取  13
    1.6.5 DNA浓度及纯度的测定  13-14
    1.6.6 目的基因的PCR扩增  14
    1.6.7 琼脂糖凝胶电泳  14-15
  1.7 统计学分析  15-16
第二章结果  16-23
  2.1 传统细菌培养结果  16
  2.2 药物敏感试验  16
  2.3 PCR检测细菌结果  16-20
    2.3.1 标准菌株检测  17-18
    2.3.2 CRS标本检测  18-20
  2.4 两种方法检测结果比较  20-23
第三章讨论  23-28
  3.1 CRS传统细菌培养现状  23
  3.2 新型细菌检测技术的发展  23
  3.3 PCR技术鉴定细菌的理论  23-24
  3.4 PCR技术用于CRS细菌检测的国内外动态  24
  3.5 两种方法检测结果的对比分析  24-26
  3.6 实验结果的可靠性分析  26
  3.7 本研究的问题分析和未来展望  26-28
结论  28-29
参考文献  29-32
综述  32-49
  参考文献  43-49
攻读学位期间的研究成果  49-50
致谢  50-51

慢性鼻—鼻窦炎细菌PCR检测和传统培养对比分析

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