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何首乌饮对运动性疲劳大鼠睾丸间质细胞的影响

作　者: 孙一翀
导　师: 高福禄
学　校: 承德医学院
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 何首乌饮运动型疲劳血清睾酮血生化 P450scc HMG-CoA STAR SR-BI
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

运动性疲劳是指高强度超负荷的连续运动，机体机能和运动负荷不能彼此适应，所导致的疲劳连续性积累，继而所引发的一系列的机体功能紊乱或是病理状态的产生。疲劳还将伴随有一定的健康损害，即由于运动引起的机体生理和生化的改变，致使机体运动能力的暂时性下降。传统中药在延缓和消除疲劳方面具有独特的优势,其中补肾方剂何首乌饮由《宣明论方》何首乌丸加味而成,在何首乌、肉苁蓉、怀牛膝的基础上增加淫羊藿、丹参、茯苓,具有补肝肾、益精血、延年益寿，消除疲劳之功效。本研究对运动性疲劳大鼠进行中药干预，观察其对运动性疲劳大鼠的血生化指标和睾酮合成限速酶P450scc和StAR以及睾丸胞内胆固醇合成限速酶HMG-CoA和SR-BI的表达影响。为进一步研究中药抗运动性疲劳的作用及机理奠定理论和实验基础。目的：采用生物化学、免疫组织化学、RT-PCR和Western Blotting方法，通过检测各组大鼠的血生化指标以及睾丸组织P450scc、StAR和HMG-CoA、SR-BI的表达。探讨何首乌饮缓解运动性疲劳的机制。方法：1.实验动物的选择及分组：选用8周龄清洁级SD（Sprague–Dawley，SD）雄性大鼠75只，（动物由河北医科大学实验动物中心提供，合格证编号1005050)，每只体重为180～200g。自由进食，饮水，室温20℃-25℃，相对湿度45%-55%，每天光照12h，随机分为6组：安静对照组（A组）、安静何首乌饮组（B组）、模型组（C组）、自然恢复组（D组）、何首乌饮治疗组（E组）和何首乌饮预防组（F组），每组15只。2.建立大鼠运动性疲劳模型：游泳池内壁光滑呈圆形，直径约50cm，水深70cm，水温30℃±2℃。第一周进行适应性游泳训练，每天一次，共七次。第1天下水游泳30min，此后逐日按照40%幅度增加至第7天游泳2h；从第二周开始适应性负重游泳训练，第一次负重自身体重的0.5%，此后逐日递增，负1%、2%、3%、4%每次游泳2h，每天一次。当第六天负重增加到5%时，游泳时间明显缩短，所以选择自身体重的4%作为最终的负重量；此后六周每天一次进行游泳力竭实验（游泳力竭标准为大鼠游泳出现明显不协调，经水面下沉10s后仍不能上浮，且放置平面无法完成翻正反射）。3.各组处理：A组大鼠不进行游泳训练，每天灌胃等量生理盐水。B组大鼠不进行游泳训练，每天灌胃何首乌饮20g/(kg.d)。在制作运动疲劳模型过程中，C组、D组、E组和F组大鼠每天下午进行力竭游泳训练，其中F组在上午灌胃何首乌饮20g/(kg.d)进行预防，连续六周。在造模的第42d各组大鼠经内眦眶后静脉取血约1.5mL，离心取上清，检测血清睾酮、血尿素氮、血乳酸，血浆血红蛋白和血清肌酐来判断造模是否成功。判断标准：与安静对照组比较模型组大鼠血清睾酮含量明显降低；血尿素氮含量和血乳酸浓度明显升高；血红蛋白含量降低；血肌酐明显升高；且大鼠出现食量减少，体重下降，运动迟缓等现象表明模型已建立成功。在造模成功后，将C组大鼠处死；D组大鼠自由进食饮水，不给予任何干预；E组大鼠每天灌胃何首乌饮20g/(kg.d)进行治疗； F组大鼠停训即停药，自由进食饮水，连续60天。4.标本采集与处理：实验结束后，将各组大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，经眼内眦眶后静脉从取血约2ml，1000r/min离心20min，吸取上清液置-80℃低温冰箱保存待测，然后经左心室向升主动脉插管快速灌注预冷的焦炭酸二乙酯（DEPC）处理的生理盐水约250ml直到流出的液体变清为止，迅速取出左侧睾丸组织投入液氮，30min后移到-80℃低温保存，以备用作Western blotting、RT-PCR测定。右侧睾丸组织经4%多聚甲醛灌注固定、石蜡包埋以备用作免疫组织化学染色。结果：1.一般情况观察：安静对照组和安静何首乌饮组大鼠皮毛光洁整齐，活动自如，精神状态良好。其余四组大鼠普遍精神倦怠，运动迟缓，反应淡漠，皮毛脱落，体型瘦弱，饮食减退，体重下降。2.血清睾酮和血红蛋白：模型组大鼠与安静对照组大鼠相比血清睾酮含量明显降低，血红蛋白含量有所降低，差异有统计学意义(P<0.05)；何首乌饮治疗组、预防组比模型组大鼠血清睾酮含量明显升高，血红蛋白含量有所升高，差异有统计学意义(P<0.05)；预防组大鼠与治疗组大鼠相比血清睾酮含量和血红蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。3.血乳酸、血肌酐和血清尿素氮：模型组大鼠与安静对照组大鼠相比血乳酸浓度，血肌酐含量和血清尿素氮含量明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；何首乌饮治疗组、预防组大鼠比模型组大鼠血乳酸浓度，血肌酐含量和血清尿素氮含量明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；预防组大鼠与治疗组大鼠相比血乳酸，血肌酐含量和血清尿素氮无显著差异(P>0.05)。4.免疫组织化学结果：P450scc免疫组化阳性颗粒为棕黄色颗粒主要表达于间质细胞胞质和精母细胞胞质，B组、E组和F组阳性信号强于D组和A组（P＜0.05），A组强于C组（P＜0.05）。HMG-CoA免疫组化阳性颗粒主要表达于睾丸间质细胞胞质，B组和F组表达最弱，C组最强，与其余各组相比有统计学意义。STAR和SR-BI免疫组化阳性颗粒主要表达于睾丸间质细胞胞质，B组、E组和F组阳性信号强于A组和D组（P＜0.05），C组阳性信号最弱。5. Western blotting和RT-PCR结果：P450scc蛋白和mRNA表达变化为：B组、E组和F组明显高于D组和A组（P＜0.05），C组明显低A组（P＜0.05），A组和D组之间没有显著性差异；HMG-CoA蛋白和mRNA表达变化为：B组和F组明显低于E组、D组和A组（P＜0.05），C组明显高A组（P＜0.05），A组和D组之间没有显著性差异；STAR和SR-BI蛋白和mRNA表达变化为：E组和F组明显高于A组和D组（P＜0.05），C组明显低于A组（P＜0.05），A组和D组之间没有显著性差异。结论：1.运动性疲劳大鼠模型的建立是成功的。2．何首乌饮能够提高运动性疲劳大鼠血清睾酮和血红蛋白的浓度。3.何首乌饮能够显著降低运动性疲劳大鼠血乳酸、血肌酐和血清尿素氮的浓度。4.何首乌饮可以通过降低HMG-CoA和提高SR-BI蛋白表达，而改善运动疲劳大鼠睾酮分泌。5.何首乌饮可以提高睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达

全文目录

摘要  5-8
ABSTRACT  8-13
英文缩写  13-14
前言  14-15
材料与方法  15-29
结果  29-32
附图  32-56
附表  56-65
讨论  65-69
结论  69-70
参考文献  70-73
综述  73-77
  参考文献  75-77
致谢  77-78
个人简历  78

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