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不同体重和不同盐度条件下仿刺参（Apostichopus japonicus）免疫活性的研究

作　者: 田丹
导　师: 刘云
学　校: 中国海洋大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 仿刺参体重盐度免疫活性
分类号: S968.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

仿刺参（Apostichopus japonicus）属于棘皮动物门海参纲，是一种具有很高营养价值和药用价值的海参，几百年来一直被视为一种名贵的海味，有“海中人参”的美誉，是我国北方重要的经济养殖品种。然而，随着养殖规模的扩大，病害问题也日益突出。寻找合适的方法提高仿刺参自身的抗病力，已成为急需要解决的问题。然而，目前对于仿刺参免疫机制仍不清楚，没有一套科学的仿刺参免疫指标评价体系的现状也给这个问题的解决增加了困难。本论文以仿刺参为对象，分别以体重和盐度为单因素，研究了其不同阶段的免疫活性和应激反应中各个免疫组分的变化，以期为阐明仿刺参的免疫机制及建立适合的免疫指标提供基础的实验依据。本文主要有以下三个方面内容：㈠仿刺参体腔细胞的分类采用瑞士-姬娒萨混合染色法和活细胞涂片法观察了仿刺参体腔细胞的形态特征，并将体腔细胞分为了：淋巴样细胞、颗粒细胞、变形细胞、透明细胞、结晶细胞和纺锤细胞六大类。㈡不同体重仿刺参免疫活性的研究以体重为单因素，选取了50g、100g和150g左右的仿刺参，对其体腔细胞数量、各类群细胞比例、吞噬活性、呼吸爆发活性、抗菌活力、溶菌活力、凝血活性、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和酚氧化酶（PO）等进行了研究。结果显示：体腔细胞数量及各细胞类群比例、蛋白浓度、凝血活性、SOD和POD活性在不同体重仿刺参中存在较大差异，而呼吸爆发活性、抗菌活力和溶菌活力差异不显著。体腔细胞数量、蛋白浓度、SOD活性以及淋巴样细胞、颗粒细胞和变形细胞比例在体重150g组最高，透明细胞比例和POD活性在150g组最低，而100g组中淋巴样细胞和变形细胞比例及凝血活性最低，说明了不同体重仿刺参的免疫活性存在明显差异，也表明在不同生长阶段仿刺参免疫系统中起主要作用的免疫组分不同。本实验中几乎检测不到PO活性，说明其在体腔液中含量很低，对于它的研究需要更为精密的检测手段。㈢研究了盐度变化对仿刺参免疫活性的影响以盐度为单因素，通过改变海水盐度研究了仿刺参在应急状态下免疫组分的变化。实验组将盐度从30提高到40，然后经过35恢复到30，并在各个盐度点进行免疫活性测定。结果表明：盐度变化对仿刺参体腔细胞数量、各类群细胞比例、呼吸爆发活性、溶菌活力、抗菌活力和过氧化物酶（POD）浓度具有显著性影响；而对超氧化物歧化酶（SOD）、凝血活性和吞噬活性影响不显著。在盐度变化中，体腔细胞数量随盐度升高而升高，但各组间差异不显著；而各类群细胞比例变化明显，盐度升高时大淋巴样细胞、变形细胞和透明细胞比例迅速降低，而颗粒细胞和小淋巴样细胞比例明显上升，后各细胞比例随盐度下降逐渐恢复接近初始水平；呼吸爆发活性在盐度升到40时，显著增强（P<0.05），然后随盐度逐渐降低；溶菌活力在盐度变化中虽呈先降低后升高的趋势，但在盐度恢复到30后，溶菌活力大大增强（P<0.05）；抗菌活力在盐度升高时迅速降低（P<0.05），而后缓慢升高；POD浓度在盐度变化中迅速降低后逐渐上升，但恢复到30时浓度仍较低（P<0.05）。研究表明，在盐度刺激下，呼吸爆发和抗菌活力变化灵敏，可作为仿刺参盐度响应的主要免疫指标。而各免疫组分的变化，也说明了盐度升高、仿刺参处于不利环境中，影响了其部分免疫力，使得抗病力下降，易遭受病害。综合体重和盐度的研究，作者认为呼吸爆发、抗菌活力不仅在生长中表现稳定，而且盐度应激中表现灵敏，应为仿刺参免疫指标的必要内容。而体腔细胞数量、各类群比例、溶菌活力、POD也具有较灵敏的变化，也可作为免疫指标的基本内容。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-10
目录  10-14
第一章仿刺参养殖现状及研究进展  14-28
  0 前言  14
  1 仿刺参概述  14-17
    1.1 仿刺参简介  14-17
      1.1.1 分类地位及分布  15
      1.1.2 形态特征及生活习性  15
      1.1.3 营养价值  15-16
      1.1.4 影响生长及存活的因素  16-17
  2 仿刺参养殖与研究现状  17-19
    2.1 刺参养殖现状  17-18
      2.1.1 养殖方式  17
      2.1.2 现有问题  17-18
    2.2 仿刺参研究现状  18-19
  3 棘皮动物的防御机制  19-25
    3.1 细胞免疫  19-22
      3.1.1 体腔细胞的种类  20
      3.1.2 体腔细胞的功能  20-22
    3.2 体液免疫  22-25
      3.2.1 非特异性免疫因子  22-23
      3.2.2 免疫酶  23-24
      3.2.3 补体系统  24-25
  4 仿刺参免疫机制研究进展  25-26
  5 本实验的主要内容、目的和意义及创新点  26-28
    5.1 本实验的主要内容  26
    5.2 研究目的及意义  26-27
    5.3 创新点  27-28
第二章仿刺参（Apotichopus japonicus）体腔细胞类型的研究  28-36
  1 实验用品  29-30
    1.1 实验材料  29
    1.2 实验仪器  29
    1.3 实验药品  29
    1.4 几种常用溶液配方  29-30
  2 实验方法  30-31
    2.1 取样  30
    2.2 稀释  30
    2.3 染色和活细胞涂片  30
    2.4 镜检  30-31
  3 实验结果  31-34
  4 讨论  34-35
  5 小结  35-36
第三章不同体重仿刺参（Apotichopus japonicus）免疫活性的研究  36-54
  1 实验用品  36-38
    1.1 实验材料  36-37
    1.2 实验仪器  37
    1.3 实验药品  37
    1.4 几种溶液配方  37-38
  2 实验设计及方法  38-44
    2.1 实验设计  38
    2.2 样品的采集  38
    2.3 实验方法  38-43
      2.3.1 体腔细胞数量的测定  38-39
      2.3.2 体腔细胞分类与各类型细胞计数  39
      2.3.3 蛋白浓度的测定  39-40
      2.3.4 吞噬活性的测定  40
      2.3.5 呼吸爆发活性的测定  40-41
      2.3.6 凝血活性的测定  41
      2.3.7 抗菌活力的测定  41-42
      2.3.8 溶菌活力的测定  42
      2.3.9 过氧化物酶（POD）活力的测定  42-43
      2.3.10 超氧化物歧化酶（SOD）活力的测定  43
      2.3.11 酚氧化酶（PO）活力的测定  43
    2.4 数据处理与分析  43-44
  3 实验结果  44-50
    3.1 不同体重仿刺参各类型体腔细胞的比例  44
    3.2 不同体重仿刺参的体腔细胞数量  44-45
    3.3 不同体重仿刺参体腔液中蛋白浓度的含量  45-46
    3.4 不同体重仿刺参的吞噬活性和呼吸爆发活性  46-47
    3.5 不同体重仿刺参的凝血活性、抗菌活力和溶菌活力  47-49
    3.6 不同体重仿刺参的 PO、POD 和 SOD 活性  49-50
  4 讨论  50-52
  5 小结  52-54
第四章不同盐度对仿刺参(Apostichopus japonicus)免疫活性的影响研究  54-69
  1 实验用品  55
    1.1 实验材料  55
    1.2 实验仪器  55
    1.3 实验药品  55
    1.4 几种溶液配方  55
  2 实验设计与方法  55-59
    2.1 饲养条件  55
    2.2 实验设计  55-56
    2.3 测定方法  56-59
      2.3.1 样品的采集  56
      2.3.2 体腔细胞数量的测定  56
      2.3.3 体腔细胞各类群比例测定  56
      2.3.4 吞噬活性的测定  56-57
      2.3.5 呼吸爆发活性的测定  57
      2.3.6 凝血活性的测定  57
      2.3.7 溶菌活力和抗菌活力的测定  57
      2.3.8 过氧化物酶（POD）含量的测定  57
      2.3.9 超氧化物歧化酶（SOD）活力的测定  57-58
      2.3.10 蛋白浓度的测定  58
      2.3.11 标准曲线  58-59
    2.4 数据处理与分析  59
  3 实验结果  59-65
    3.1 盐度变化对仿刺参体腔细胞数量的影响  59-60
    3.2 盐度变化对各类型体腔细胞比例的影响  60
    3.3 盐度变化对仿刺参吞噬活性的影响  60-61
    3.4 盐度变化对仿刺参呼吸爆发活性的影响  61-62
    3.5 盐度变化对凝血活性的影响  62
    3.6 盐度变化对抗菌活力和溶菌活力的影响  62-64
    3.7 盐度变化对仿刺参 POD 浓度和 SOD 活性的影响  64-65
  4 讨论  65-68
    4.1 盐度变化对体腔细胞数量和各细胞类型比例的影响  65-66
    4.2 盐度变化对体腔细胞吞噬活性和呼吸爆发活性的影响  66
    4.3 盐度变化对抗氧化酶活性的影响  66-67
    4.4 盐度变化对非特异性免疫因子的影响  67-68
  5 小结  68-69
总结与展望  69-71
  1 总结  69-70
  2 展望  70-71
参考文献  71-82
致谢  82-83
研究生期间的学术成果  83-84

不同体重和不同盐度条件下仿刺参（Apostichopus japonicus）免疫活性的研究

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