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基于CHD-W基因对鹤类和鹳类分子性别鉴定的通用方法

作　者: 刘卉玲
导　师: 蔡亚非
学　校: 安徽师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: CHD-W基因分子性别鉴定鹤类鹳类
分类号: Q953
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 25次
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内容摘要

鹤类和鹳类是雌雄同型鸟类,鉴定它们的性别很困难。设计引物用PCR方法来扩增一段180bp的雌性特异片段。将PCR产物克隆成载体PMD-18T,然后导入E.coli DH-5α。对克隆片段进行测序,将该序列递交GenBank (登录号为: AY366489,AY366703,AY367004,AY367005和AY377921)。NCBI上BLAST对序列进行比对发现176bp片段包含87bp内含子和89bp外显子,为雌性特异序列。通过DNAstar 2.0 Megalign CLUSTAL方法对该基因的起源和演化做了探讨,通过人工配对的鹤类和东方白鹳大都能够进行正常繁殖,也进一步验证前期性别鉴定是成功的。本鉴定方法同以往的鉴定方法相比,鉴定范围更广,应用潜力更大。过去很多鉴定方法仅限于一种鸟类的检测,而该引物对鹤类和鹳类鉴定准确率极高。该鉴定方法是否可以应用于其它动物性别鉴定,需进一步扩大检测动物范围,可以在动物园和野生动物保护及救助部门进行推广应用。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-9
第一章文献综述  9-19
  1 鸟类的性别决定  9-10
  2 鸟类的性别鉴定方法  10-16
    2.1 鸟类性别鉴定的传统方法  11-12
    2.2 分子鉴定法  12-16
  3 展望  16
  参考文献  16-19
第二章鸟类无损伤DNA 提取、引物的筛选及性别鉴定  19-31
  1 材料与方法  20-24
    1.1 非损伤采样法  20-21
    1.2 血样的采集  21
    1.3 DNA 提取方法  21-22
    1.4 引物的设计  22-23
    1.5 PCR 反应体系和反应条件  23
    1.6 PCR 产物分析  23-24
    1.7 仪器和试剂  24
  2 结果  24-28
    2.1 DNA 提取结果比较  24-25
    2.2 引物筛选和性别鉴定  25-26
    2.3 引物组合2  26-27
    2.4 引物组合3  27-28
  3 讨论  28-29
  参考文献  29-31
第三章鹤类CHD-W 基因生物信息学分析  31-43
  1 材料与方法  31-35
    1.1 材料  31-32
    1.2 试剂  32
    1.3 将目的基因连接到pGEM?-T Easy Vector 上（TA 克隆）  32-35
    1.4 DNAstar 2.0 软件进行生物信息学分析  35
  2 结果  35-41
  3 讨论  41-42
  参考文献  42-43
第四章动物繁殖行为观察  43-46
  1 材料与方法  43
  2 结果  43-44
  3 讨论  44-45
  参考文献  45-46
第五章结论  46-47
附录（本研究成功进行性别鉴定的鸟类图片）  47-48
致谢  48-49
附录：读研期间论文发表情况及获奖情况  49

基于CHD-W基因对鹤类和鹳类分子性别鉴定的通用方法

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