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病毒性心肌炎病原分子杂交检测和免疫损伤机理的实验研究

作　者: 沈茜
导　师: 汪美先
学　校: 第四军医大学
专　业: 医学病毒学和免疫学
关键词: 病毒性心肌炎 肠道病毒 柯萨基B3病毒 Balb/c鼠模型 核酸分子杂交 生物素标记探针 免疫损伤机理
分类号: R542.21
类　型: 博士论文
年　份: 1991年
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内容摘要


病毒性心肌炎的发病率逐年上升，已成为心血管系统的常见病、多发病。柯萨基B组病毒(Coxsackie group B virus，CoxB)感染是病毒性心肌炎的重要致病因素。病毒性心肌炎的确诊必须得到病毒在心肌细胞内复制的证据，由于感染性病毒在心肌细胞内的复制期仅1～2周，要从就诊的病毒性心肌炎患者的心肌组织中检出感染性病毒或病毒抗原都是极其困难的，常用的病毒学和血清学检测方法已完全不能胜任。病毒性心肌炎免疫病理损伤的机理非常复杂，已知与抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用，T细胞的损伤效应等有关。然而，免疫活性细胞在免疫损伤中的作用及相互关系等的研究还存在许多悬而未决的问题；有关Mo／Mφ及单核因子在病毒性心肌炎病理过程中的变化规律和作用、神经内分泌系统在免疫损伤中的参与和对免疫活性细胞的调节及作用等等的研究，目前均尚未见报道。 本研究采用基因工程技术将三个包含90％Cox B3基因信息的cDNA片段进行重组和分子克隆，制备生物素标记的核酸探针。在此基础上建立了斑点核酸杂交法和原位核酸杂交法，应用于CSF、粪便等临床标本和小鼠Cox B3心肌炎及心肌炎、心肌病毒患者组织中肠道病毒RNA的检测，探讨核酸分子杂交技术在病毒性心肌炎病原检测中的实用性。同时，以Cox B3诱导的Balb／C鼠心肌炎为模型，采用免疫组化、放射免疫分析、放射配体结合及生物学活性测定等

全文目录


英文缩写字表  4-6
本研究形成的论文  6-7
摘要  7-13
Abstract  13-21
第一部分 核酸分子杂交技术在病毒性心肌炎病原检测中应用  21-68
  前言  21-25
  材料和方法  25-37
  实验结果  37-54
    1、Cox B3 DNA的分子克隆和探针制备  37
    2、Cox B3克隆的cDNA探针与肠道病毒RNA杂交的特异性  37-41
    3、Cox B3 cDNA探针斑点杂交的敏感性  41
    4、斑点杂交法的重复性试验结果  41
    5、临床标本处理方法的比较  41-42
    6、检测标本中细胞和蛋白质对杂交结果的影响  42
    7、Cox B3 cDNA探针原位杂交的特异性  42-43
    8、感染小鼠心肌组织中Cox B3 RNA的原位检测  43-44
    9、心肌炎和心肌病患者心肌组织中肠道病毒RNA的原位检测  44-54
  讨论  54-63
  结论  63-64
  参考文献  64-68
第二部分 病毒性心肌炎免疫损伤的机理研究  68-136
  前言  68-73
  材料和方法  73-88
  实验结果  88-115
    1、Cox B3感染大鼠心肌细胞微量模型的建立  88-91
    2、Cox B3 Balb／c鼠心肌炎模型的建立  91
    3、Cox B3感染鼠TNF含量的变化  91-93
    4、TNF对Cox B3感染大鼠心肌细胞的保护作用  93-95
    5、Cox B3感染鼠淋巴细胞亚群及NK细胞等的变化  95-99
    6、Cox B3感染鼠NK细胞活性和干扰素测定  99-102
    7、Cox B3感染鼠NK细胞膜β—EP受体的改变  102-105
    8、Cox B3感染鼠心肌细胞膜β—EP受体的改变  105-107
    9、Cox B3感染鼠血浆和心脏ir—β—EP浓度的变化  107-108
    10、Cox B3感染鼠血浆和心脏组cAMP、cGMP含量的变化  108-115
  讨论  115-126
    1、单核—巨噬系统在病毒性心肌炎中的作用  115-117
    2、NK细胞和干扰素在病毒性心肌炎的中作用  117-120
    3、T淋巴细胞与心肌细胞免疫损伤  120-121
    4、β—EP含量和β—EP受体变化的意义  121-124
    5、Cox B3感染鼠第二信使系统的变化  124-126
  结论  126-128
  谢言  128-129
  参考文献  129-136
文献综述：柯萨基B组病毒分子生物学研究进展  136-148
攻读博士研究生期间完成的协作课题和形成的论文  148-149

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 心脏疾病 > 心肌疾病 > 心肌炎
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