学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

桂皮醛衍生物对CVB3诱发的病毒性心肌炎作用研究

作　者: 刘欣欣
导　师: 王四旺
学　校: 第四军医大学
专　业: 生药药理
关键词: 柯萨奇病毒 病毒性心肌炎 桂皮醛 α-溴代对氯肉桂醛 α-溴代对甲基肉桂醛 对氯肉桂醛
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 18次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


病毒性心肌炎（Viral myocarditis,VMC）是病毒侵犯心脏引起的心肌实质或间质局限性或弥漫性病变,为临床多发病,在儿童和青壮年中发病率呈逐年上涨的趋势。病毒的侵入是诱发VMC的一个主要原因,其中又以柯萨奇B组3型病毒（Coxsackievirus B 3,CVB3）最为常见,它可导致心肌的病变和死亡。心肌细胞膜上的TLR4识别病毒或是病毒损伤后的心肌细胞成分（均属于PAMP）,激活后的TLR4可通过TLR4-NF-κB途径进一步激活核转录因子NF-κB,后者则可引起一系列的炎症应答,包括炎性因子(TNF,IL-1,IL-6,INF-γ等)释放,细胞粘附分子产生,炎症细胞的募集等。因此,在对VMC治疗尚无特效药的今天,研究如何在体内抑制CVB3的药物,具有重要意义并提供了新的思路。药理学研究表明,桂皮醛（Cinnamaldehyde,CA）具有抗真菌、抗病毒、抗肿瘤等作用,2008年Youn HS等进一步证实CA对体外LPS诱发TLR4-NF-κB信号转导途径具有显著抑制作用。前期实验证明CA是通过TLR4-NF-κB途径对VMC产生明显的治疗效果,但因CA在体内化学性质不稳定,于是以CA为先导化合物分别合成了5种衍生物,选择其中物化性质稳定的3种,即α-溴代对氯肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛、对氯肉桂醛进行体内、外的抗CVB3的作用研究。比较3种衍生物对TLR4-NF-κB信号转导的抑制作用,筛选出最敏感最有效的结构药物。研究目的采用小鼠体内VMC模型和体外细胞模型,评价CA衍生物对VMC的治疗作用,探讨其有效性及其作用机制,为开发新药提供依据。研究方法第一部分CA衍生物的合成1方法采用羟醛缩合及加成反应,以CA为先导化合物,合成一系列的衍生物。包括⑴对CA苯环上五个位点分别进行供电子基和吸电子基取代,考察不同取代基和不同位点取代对生物活性的影响。⑵具有CA与阿昔洛韦、更昔洛韦双重功能的分子设计。⑶CA手性衍生物的合成及活性研究。对合成的衍生物进行红外、核磁及氢谱等分析。2结果及结论从各种衍生物的物理、化学性质分析发现,α-溴代对氯肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛、对氯肉桂醛性质稳定,可以进行下一步抗CVB3作用的研究。第二部分体外实验1α-溴代对氯肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛、对氯肉桂醛的细胞毒性作用1.1方法培养心肌细胞原代,以1×105心肌细胞/孔接种于96孔板。待细胞生长成片之后,加入0-1000μM含有α-溴代对氯肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛、对氯肉桂醛的培养液孵育72h。设立空白对照组,MTT法检测细胞存活率（n=3）、比较各组细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）。1.2结果α-溴代对氯肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛、对氯肉桂醛对心肌细胞的半数毒性浓度TC50分别为2151.28μg/mL , 1475.32μg/mL ,22460.32μg/mL。1.3结论药物对心肌细胞毒性表现为细胞跳动速度减慢,细胞型态扁缩,从96孔板底壁脱落、甚至死亡。α-溴代对氯肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛在100μM开始有明显CPE,而1000μM对氯肉桂醛还未出现明显CPE。2α-溴代对氯肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛、对氯肉桂醛体外抗CVB3的作用研究2.1方法原代心肌细胞以1×105/孔接种于24孔板中培养。待细胞生长成片生长后,接种CVB3。孵育后1h后给予0.1、1、10、100、1000μM三种桂皮醛衍生物,72h观察CPE,用HeLa细胞测定病毒滴度,设立空白对照组和CVB3病毒（n=3）,确定量效关系。用ELASA试剂盒检测细胞离心后上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量,并用RT-PCR检测细胞中CVB3的含量变化。2.2结果α-溴代对氯肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛、对氯肉桂醛3种桂皮醛衍生物对CVB3的半数抑制浓度IC50分别为178.94μg/mL、173.35μg/mL、6045.25μg/mL。治疗指数（Therapeutic index,TI）分别为12.02,8.51,3.71。3种CA衍生物都能在一定程度上抑制CVB3mRNA的复制以及TNF-α、IL-1β、IL-6在CVB3感染的心肌细胞中的分泌水平。2.3结论10-1000μM对氯肉桂醛可以降低感染CVB3心肌细胞中的病毒滴度,对心肌细胞起保护作用;0.1-1000μMα-溴代对氯肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛在体外具有抗CVB3病毒的作用,但同时对宿主细胞也产生明显毒性。经过体外一系列实验的分析,发现α-溴代对氯肉桂醛在治疗VMC方面具有高效低毒的特点。第三部分体内实验1不同剂量的α-溴代对氯肉桂醛对VMC小鼠的治疗作用1.1方法60只BALB/c小鼠分为6组,每组10只。用100μL 10IU/mL CVB3 i.p诱导BALB/c小鼠的VMC模型,隔离实验室内饲养。另外选取10只BALB/c小鼠作对照组,注射不含病毒的Eagle液100μL。在接种病毒72h后各组分别给药,CVB3组i.p 2500mg/kg NS;对照组i.p 2500mg/kg NS;α-溴代对氯肉桂醛低剂量组i.g 6mg/kg;α-溴代对氯肉桂醛中剂量组i.g 18mg/kg;α-溴代对氯肉桂醛高剂量组i.g 56mg/kg;干扰素组i.p 10mg/kg,连续给药7天。病毒感染后第7天处死,取心脏,一分为三,一半用作TLR4和NF-κB蛋白的Westen Blot技术检测;另一半作石蜡切片,HE染色和制片作NF-κB免疫组化染色;剩下的一半用于小鼠心肌内CVB3滴度的检测。1.2结果α-溴代对氯肉桂醛高剂量组能够显著的抑制TLR4和NF-κB蛋白的表达水平（P<0.01）,并能够显著降低VMC小鼠心肌中的CVB3滴度（P<0.01）。1.3结论以CA为先导合成的衍生物对VMC有治疗作用,其中有以α-溴代对氯肉桂醛效果最为明显,且在中高剂量组治疗作用要比桂皮醛更有效。通过实验发现,合成的三种衍生物也是通过抑制TLR4-NF-κB信号转导通路来发挥治疗VMC的作用,但对其作用机制还需进一步研究。

全文目录


缩略语表  5-6
中文摘要  6-10
英文摘要  10-15
前言  15-16
文献回顾  16-21
  1 病毒性心肌炎的发病机制  16-17
  2 Toll4-NF-κB 信号转导通路与病毒性心肌炎  17-19
  3 病毒性心肌炎药物治疗概况  19-20
  4 CA 与 VMC  20-21
第一部分 CA 衍生物的合成  21-32
  1 实验材料  21
  2 实验方法  21-24
  3 实验结果  24-30
  4 讨论  30-32
第二部分 CA 衍生物对体内和体外CVB_3的作用研究  32-60
  1 实验材料  32-35
  2 实验原理及方法  35-44
  3 实验结果与结论  44-60
讨论  60-64
结论与创新  64-65
参考文献  65-70
个人简历和研究成果  70-71
致谢  71

相似论文

  1. 桂皮醛溶液对内氏放线菌的LTA诱导牙周膜成纤维细胞产生TNF-α影响的研究,R781.4
  2. 柯萨奇病毒B3对Hela细胞mTOR/p70S6K表达的调控作用,R737.33
  3. 成人急性重症病毒性心肌炎的临床分析,R542.21
  4. 张明雪教授运用《伤寒论》六经辨证治疗病毒性心肌炎研究,R249
  5. 郑州市某区2009年手足口病流行病学及临床特征,R725.1
  6. 黄芪养心汤治疗病毒心肌炎气阴两虚型的临床研究,R259
  7. 心肌康方案对成人病毒性心肌炎急性期患者中医证候疗效的初步观察,R259
  8. “羚桂龙牡汤”治疗小儿病毒性心肌炎的临床疗效评价,R272
  9. 腺病毒、柯萨奇病毒及其受体与大肠癌相关性研究,R735.34
  10. 柯萨奇病毒及T淋巴细胞亚群改变与1型糖尿病的关系,R587.1
  11. α-1b干扰素与清热养阴中药序贯疗法预防病毒性心肌炎的临床研究,R542.21
  12. 半乳糖凝集素-9及其受体Tim-3在小鼠病毒性心肌炎中的动态变化及意义,R542.21
  13. 小儿病毒性心肌炎中医诊疗指南研究,R272
  14. 广州市白云区某社区轮状病毒、诺如病毒腹泻的监测,R725.1
  15. 深圳地区柯萨奇病毒A组16型的分子流行病学研究及RT-LAMP检测方法的建立,R181.3
  16. 抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方皂苷对病毒性心肌炎小鼠的治疗作用,R285.5
  17. 骨桥蛋白在病毒性心肌炎小鼠心肌中表达的意义,R542.21
  18. 参芪扶正注射液对病毒性心肌炎小鼠心脏胶原代谢的影响,R285.5
  19. 不同性别背景下巨噬细胞极化的差异及其对病毒性心肌炎发病的影响,R542.21
  20. 心肌宁水丸治疗病毒性心肌炎的疗效观察,R259

中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
© 2012 www.xueweilunwen.com