学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

绿脓杆菌外膜通透性与耐药性关系及其在新药筛选中初步应用的研究

作　者: 左联
导　师: 姚天爵；张致平
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 微生物药学
关键词: 绿脓杆菌抗生素外膜蛋白碳青霉烯类耐药机制标准菌株多重耐药缓冲液蛋白脂质内酰胺酶
分类号: R965.1
类　型: 博士论文
年　份: 1997年
下　载: 99次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

绿脓杆菌是一系列严重的化脓性感染的重要致病菌，具有天然的和后天获得的耐药性，临床治疗很棘手。本论文了解了绿脓杆菌外膜微孔蛋白的性质，研究了绿脓杆菌外膜通透性与耐药性之间的关系，探讨了临床分离的多重耐药绿脓杆菌的耐药机制，并在此基础上首次建立了作用于外膜的抗绿脓杆菌药物的定向初筛方法，具有较重要的理论与实际意义。在研究绿脓杆菌外膜微孔蛋白性质时，选用了绿脓杆菌标准菌株PAO1，以EDTA-溶菌酶法与超速离心法提取其外膜蛋白，SDS-PAGE分析外膜蛋白图谱，并利用DEAE离子交换高压液相色谱柱加以纯化，通过重建蛋白脂质体测定了不同药物对外膜的通透作用。该部分实验结果证实了绿脓杆菌外膜微孔蛋白OprC（分子量70KD）、OprD₂（46KD）和OprE（43KD）能够形成小孔道，具有通透功能。但小分子亚胺培能（碳青霉烯类）为选择性通过OprD₂通道进入胞内，头孢菌素类和氨基糖苷类药物进入细菌体内的途径仍不十分清楚。在探讨临床分离的多重耐药绿脓杆菌的耐药机制过程中，以绿脓杆菌标准菌株PAO1为对照，应用SDS-PAGE外膜蛋白图谱和β-内酰胺酶测定方法，研究了临床分离的四株多重耐药绿脓杆菌对碳青霉烯类等β-内酰胺类抗生素的耐药机制。结果表明，四株绿脓杆菌分离株均缺失了外膜蛋白OprD₂，其中有两株菌产生了较高水平的β-内酰胺酶，提示其多重耐药机制可能是OprD₂的缺失和大量β-内酰胺酶的共同作用结果，其中对亚胺培能耐药的主要原因可能是OprD₂丢失。碳青霉烯类为β-内酰胺类化合物，对β-内酰胺酶稳定，对绝大多数致病菌尤其是引起医院内感染的多重耐药菌株包括绿脓杆菌具有较强的抗菌活性。本初筛方法的建立有助于寻找到作用于绿脓杆菌外膜的碳青霉烯类抗生素，并且可用于抗菌药物的作用机制研究及药物应用前景的评价。在建立初筛方法的过程中，首先选择了绿脓杆菌外膜OprD₂专一缺陷菌株7208，利用耐药菌株绿脓杆菌7208、绿脓杆菌标准菌株PAO1和PAO1（含50ug／ml氨苄青霉素）为检定菌，通过不同类型抗生素的验证，证明了该方法对碳青霉烯类化合物有较高的特异性，可用于初筛。另外，利用本初筛模型也可筛选到与β-内酰胺类抗生素有协同作用的活性物质或造成外膜缺损的化合物。应用所建立的初筛方法，从1255株放线菌中筛选到11株阳性菌株，但要说明其作用机制是否对外膜有作用，需要作进一步研究。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
前言  7-9
第一部分绿脓杆菌外膜通透性与耐药性关系的研究  9-20
  材料  9-11
  方法  11-13
  结果  13-18
  讨论  18-20
第二部分临床分离多重耐药绿脓杆菌耐药机制的研究  20-27
  材料  20-21
  方法  21-23
  结果  23-25
  讨论  25-27
第三部分作用于绿脓杆菌外膜的药物初筛方法的建立及初步应用  27-33
  材料  27-28
  方法  28-29
  结果  29-31
  讨论  31-33
总结  33-34
参考文献  34-36
致谢  36-37
综述:绿脓杆菌外膜通透性与耐药性的关系  37-46

绿脓杆菌外膜通透性与耐药性关系及其在新药筛选中初步应用的研究

内容摘要

全文目录

相似论文