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兔眼青光眼滤过术后手术区组织TGF-β1、bFGF表达的实验研究

作　者: 张大卫
导　师: 贺忠江
学　校: 天津医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 滤道成形术手术区 TGF-β1 小梁切除术后丝裂霉素 bFGF 巩膜瓣下滤过泡支架植入实验研究
分类号: R779.6
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

兔眼青光眼滤过术后手术区组织TGF-β1、bFGF表达的实验研究目的：通过建立兔眼小梁切除联合巩膜瓣下植入“M”型不可降解聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)支架的青光眼滤过手术实验模型，探讨这种房水引流植入物的有效性和手术方式的可行性；并尝试联用低浓度、短时间的抗纤维化药物丝裂霉素(MMC)，评估PMMA支架植入联合应用MMC是否增强手术效果，为其在临床上的应用提供进一步的实验依据；同时检测手术区组织TGF-β1、bFGF两种生长因子的表达，进一步了解TGF-β1和bFGF在实验性青光眼滤过术后瘢痕形成过程中的作用，观察PMMA支架植入后对手术区瘢痕形成的影响，探讨其安全性和组织相容性，同时就两种生长因子与MMC间的相互作用作一初步研究。方法：正常健康家兔随机分为手术实验组和空白对照组：实验组左眼行滤道成形术，右眼行单纯小梁切除术作为对照；术后第3天、7天、14天分别随机处死家兔取双眼手术区组织。空白对照组不做手术。另取家兔双眼行滤道成形术并联用丝裂霉素。1)比较滤道成形术和小梁切除术术前以及术后不同时间点眼压和滤过泡的变化，并同时应用超声生物显微镜观测房水滤过通道的变化；观察滤道成形术联用丝裂霉素兔眼眼压和滤过泡的变化。2)运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法，检测两种青光眼滤过术后不同时间点手术区组织中TGF-β1和bFGF mRNA的表达；检测滤道成形术联用丝裂霉素眼术后7天时手术区组织中TGF-β1和bFGF mRNA的表达。3)运用免疫组织化学方法，观察两种青光眼滤过手术术后不同时间点手术区组织中TGF-β1和bFGF蛋白水平的表达及细胞定位。结果：1)滤道成形术与小梁切除术在术前、术后14天眼压差异无显著性，在术后3天、7天时差异有显著性。2)滤道成形术后3天、7天、14天眼压分别与术前比较，差异均有极其显著性(P＜0.01)，3天时眼压下降幅度最大，降幅为48.4％，7天眼压降幅46.2％，14天眼压降幅23.8％；术后3天、7 天津医科大学博十学位论文系而膺王氰正丽雍而瓦谁貌均看显著性，而术后3天、7天两个时间点眼压比较差异无显著性。3)小梁切除术后3天、7天、14天眼压分别与术前比较，差异均有显著性，眼压下降幅度3天时最大，降幅为36.0%，7天眼压降幅31.6%，14天眼压降幅16.5%;术后3天、7天、14天各时间点眼压比较差异无显著性。4)滤道成形术与小梁切除术后滤过泡的大小无明显差别，均在低级和中级之间;UBM检查发现滤道成形术后3天、7天可以见到呈白色强回声的PMMA支架及明显的房水滤过间隙，呈黑色低回声区，术后14天仍然可以见到呈黑色低回声区的房水滤过间隙。小梁切除术后3天可见呈黑色低回声区的房水滤过间隙形成，而术后7天和14天几乎看不到房水滤过间隙的形成。5) RT一PCR法检测显示TGF一日1、bFGF mRNA在正常对照组织中即有少量表达;滤道成形手术区组织TGF一日1、bFGF mRNA的表达术后3天较对照组即有增高，术后7天时达到高峰，14天回落;小梁切除手术区组织TGF一pl、bFGF mRNA的表达与正常对照组比较，术后3天即有显著意义的增高，在7天时达到高峰，术后14天回落;两种滤过性手术术后不同时间点手术区组织TGF一pl、bFGF mRNA的表达量一致，差异无显著性。6)TGF-pl和bFGF在正常对照组织标本中几乎无阳性表达;两种青光眼滤过术后不同时间点手术区组织标本中可以见到结膜上皮细胞、巩膜纤维细胞TGF一日1染色阳性，其中7天时阳性染色细胞数较多;bFGF的阳性表达在手术区组织标本中亦不明显，只见于血管壁的内皮细胞。HE染色显示术后巩膜实质层胶原纤维束间纤维细胞明显增多，结膜下巩膜表层瘫痕组织形成。7)滤道成形术联用丝裂霉素眼眼压相对降幅大，术后7天时较术前平均下将SlnlnHg;术后滤过泡范围在2个钟点以上;RT一PCR检测结果发现7天时手术区组织TGF一pl和bFGF的表达量低于滤道成形和小梁切除术。结论:1)无论实验性青光眼滤道成形术还是小梁切除术，术后14天期间的眼压均较术前有显著意义的下降。2)滤道成形术后各时间点眼压的降幅均大于小梁切除术，说明“M”型PMMA支架植入可以维持巩膜瓣下房水滤过空间，在一定程度上增强了手术效果;UBM的观测结果证实巩膜瓣下PMMA 天津医科大学博士学位论文贾菊藏石瓢蔽丽琢清衷;对手术预后的.禅价可能优于对滤过泡的欢察。3)逆转录一聚合酶链式反应证实兔眼正常组织中TGF一pl、bFGF两种生长因子均有表达，实验性青光眼滤过手术使这两种生长因子的表达水平增高;TGF-日1的表达量高于bFGF，可能TGF一p在青光眼滤过术后瘫痕形成过程中发挥更为重要作用。4)免疫组织化学方法证实TGF一pl在手术区组织结膜上皮细胞和巩膜纤维细胞均有特异性表达，而bFGF的阳性表达只见于血管壁的内皮细胞，表明TGF一pl和bFGF与青光眼滤过术后伤口愈合过程中结膜上皮增生、纤维母细胞以及新生血管形成有关;TGF一p、bFGF在青光眼滤过术后瘫痕形成过程中发挥了重要作用。5)兔眼青光眼滤道成形术后各时间点TGF-p、bFGF的表达水平均与小梁切除术相一致，表明PMMA支架植入并没有刺激与瘫痕形成有关的这?

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中文摘要  3-6
英文摘要  6-10
前言  10-13
第一部分兔眼青光眼滤过手术的实验研究  13-37
  材料与方法  13-18
  结果  18-23
  讨论  23-37
第二部分 TGF-β1、bFGF在实验性青光眼滤过手术中的表达  37-73
  材料与方法  37-50
  结果  50-64
  讨论  64-72
  结论  72-73
参考文献  73-80
综述  80-108
  综述一转化生长因子β与青光眼滤过手术  80-88
  综述二青光眼手术中植入物的应用  88-108
致谢  108

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