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人TNF-α嵌合抗体体外亲和力成熟作用研究

作　者: 林周
导　师: 黎燕
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 分子免疫学
关键词: 体外亲和力成熟 hTNF-α 嵌合抗体链替换
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
下　载: 152次
引　用: 2次
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内容摘要

本论文的创新点：通过不同试验方法体外获得亲和力提高的新型抗人TNF-α嵌合抗体，并保持抗体的中和功能不变；建立基于抗原抗体相互识别的立体结构信息预测判断抗体亲和力及抗原识别位点的新方法；尝试在计算机模建基础上，通过定点突变进一步提高抗体亲和力。人肿瘤坏死因子α(hTNFα)是一种由单核、巨噬、T淋巴、中性粒、肥大或内皮细胞分泌产生的细胞因子，可介导多种生物学活性。当hTNF-α在体内的大量产生和释放可引起机体免疫平衡失调，并可与其它炎症因子一起产生多种病理损伤，例如恶病质和败血症休克所致的多器官功能衰竭、类风湿性关节炎(RA)、关节强直性脊柱炎(AS)、多发性硬化症(MS)、炎症性肠病(IBD)、移植物抗宿主病(GVHD)和骨髓造血紊乱综合症(MDS)等多种疾病。因此，通过应用中和hTNF-α活性的抗体，可阻断因hTNF-α水平异常增高导致的机体病理性损伤，最终达到对疾病的有效治疗目的。美国Centocor公司研制生产的抗hTNF-α嵌合抗体(商品名Remicade(？))，美国FDA、欧盟和日本相继已批准用于RA、结肠Crohn病和AS的临床治疗。本研究组于上世纪八十年代已经制备得到抗hTNFα鼠源单克隆抗体(McAb)Zd12，具有中和hTNFα细胞毒性功能，其亲和力在Ka=8×107L／mol。在其人源化过程中，抗体的亲和力有显著地降低。本课题借助链替换(Chain Shuffling)方法，以鼠源抗体Z12为母本，通过噬菌体抗体库技术亲和筛选，借助计算机合理设计获得高亲和力嵌合抗体CH22，以期达到在保持抗体中和活性的同时显著提高抗体亲和力的目的。同时借助计算机模建得到的抗原(hTNF-α)与抗体(CH22) 相互作中文摘要用的立体结构信息，通过点突变得到新的人源化抗体，进一步提高抗体亲和力和抗体中和活性。通过以上研究，获得抗hTNF一a高亲和力嵌合抗体，与212比较亲和力最高提高750倍，比Remicad姻亲和力提高6倍:其识别hTN下一a功能表位不同于Remicad礴，但中和hTNF一a活性能力与Renticad洲匆相同。嵌合抗体CH22与已公开发表的抗体均有所不同，具有独立知识产权，此方面研究申请一项发明专利。

全文目录

缩略语索引  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
引言  10-14
第一部分噬菌体抗体库(K／Z12) 和噬菌体抗体库(H／Z12) 的构建及亲和筛选  14-38
  材料和方法  14-21
  结果  21-35
  讨论  35-37
  小结  37-38
第二部分抗hTNF-α抗体H22表达和功能研究  38-76
  材料和方法  38-44
  结果  44-73
  讨论  73-75
  小结  75-76
第三部分定点突变对抗hTNF-α抗体亲和力成熟作用研究  76-91
  材料和方法  76-79
  结果  79-89
  讨论  89-90
  小结  90-91
总结  91-93
参考文献  93-101
致谢  101-102
附录一  102-106
附录二  106-110
附录三  110

人TNF-α嵌合抗体体外亲和力成熟作用研究

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