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8-PN对骨吸收功能影响的体外研究

作　者: 马宇辉
导　师: 彭维杰
学　校: 南昌大学
专　业: 药理学
关键词: MC3T3-E1 RAW264.7 8-PN RANKL OPG M-CSF
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：8-Prenylnaringenin (8-PN)是迄今发现的活性最强的植物雌激素,其改善实验性绝经后骨质疏松的作用已有报道,但其具体机制是否通过影响骨形成或骨吸收未完全阐明。本研究拟观察：1、8-PN对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)诱导成破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响,并与金雀异黄素、大豆苷元等其他植物雌激素进行比较；2、8-PN对小鼠成骨细胞株(MC3T3-E1)分泌的破骨细胞分化因子NF-κB受体的配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的影响,并与金雀异黄素、大豆苷元等其他植物雌激素进行比较。方法：1、将不同浓度的8-PN(10-8,10-7,10-6M)、金雀异黄素(10-6M)、大豆苷元(10-6M)作用于RAW264.7,加入M-CSF和RANKL诱导为破骨细胞,在第3d,6d,9d,12d分别计数破骨细胞数量；2、将上述相应浓度的药物在RAW264.7诱导分化第9d分别加入,第15d检测培养体系中牛股骨片骨吸收陷窝面积,以反映骨吸收功能；3、将上述相应浓度的药物在MC3T3-E1培养第9d加入,于第12d提取标本,RT-PCR检测细胞中RANKL、OPG、M-CSF的mRAN表达变化,ELISA检测上清液中RANKL、OPG的蛋白浓度。结果：1、8-PN可减少破骨细胞数量,剂量依赖性减少骨吸收陷窝面积,其抑制破骨细胞分化和骨吸收作用弱于雌二醇,但在骨吸收作用上强于另外两种植物雌激素。2、8-PN可剂量依赖性抑制成骨细胞表达和分泌RANKL,对OPG的表达和分泌有一定促进作用,降低RANKL/OPG比值,对M-CSF的表达则无显著影响。其对RANKL/OPG的调节效应弱于雌二醇,但强于另外两种植物雌激素。结论：8-PN能直接抑制破骨细胞分化和骨吸收,也可通过调节成骨细胞表达和分泌RANKL和OPG来间接调控破骨细胞,其作用强于金雀异黄素、大豆苷元等其他植物雌激素。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
第1章前言  9-11
第2章材料与方法  11-19
  2.1 实验材料  11-13
    2.1.1 实验用细胞株  11
    2.1.2 主要试剂和产地  11-12
    2.1.3 仪器设备和产地  12-13
  2.2 实验步骤  13-18
    2.2.1 常用试剂的配制  13
    2.2.2 细胞培养常用器具  13
    2.2.3 破骨细胞诱导分化计数  13-14
    2.2.4 破骨细胞骨吸收活性检测  14-15
    2.2.5 MC3T3-E1细胞中RANKL、OPG、M-CSF mRNA的表达检测  15-17
    2.2.6 MC3T3-E1细胞中OPG、RANKL的蛋白表达检测  17-18
  2.3 数据处理  18-19
第3章结果  19-32
  3.1 8-PN对破骨细胞分化的影响  19-20
  3.2 8-PN对破骨细胞活性的影响  20-23
  3.3 观察8-PN对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)RANKL、OPG、M-CSF的mRNA表达影响  23-32
    3.3.1 8-PN对MC3T3-E1细胞RANKL的mRNA表达影响  23-24
    3.3.2 8-PN对MC3T3-E1细胞RANKL的蛋白浓度影响  24-26
    3.3.3 8-PN对MC3T3-E1细胞OPG的mRNA表达影响  26-27
    3.3.4 8-PN对MC3T3-E1细胞OPG的蛋白浓度影响  27-29
    3.3.5 8-PN调节RANKL/OPG蛋白比例的结果  29-30
    3.3.6 8-PN对MC3T3-E1细胞M-CSF的mRNA表达影响  30-32
第4章讨论  32-35
第5章结论  35-36
致谢  36-37
参考文献  37-40
综述  40-47
  参考文献  45-47

8-PN对骨吸收功能影响的体外研究

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