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大鼠激素性股骨头坏死模型中OPG表达的变化及其机制研究

作　者: 俞楠泽
导　师: 肖鲁伟；童培建
学　校: 浙江中医药大学
专　业: 中医学
关键词: 大鼠糖皮质激素激素性股骨头坏死 OPG c-Fos AP-1 机制
分类号: R681.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 53次
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内容摘要

目的诱导大鼠激素性股骨头坏死模型,观察骨保护蛋白(OPG)及其相关因子表达的变化,探讨在激素性股骨头坏死致病过程中OPG表达的变化及其机制。方法Wistar大鼠20只,随机分成正常对照组和模型组。模型组内毒素20μg/kg两次注射,间隔24h后,甲强龙40mg/kg连续注射三次,每次间隔24h；正常对照组：同上连续五天注射等量生理盐水。6周后,腹腔静脉取血,离心取出上清,以ELISA法测血清中OPG和RANKL的含量。处死动物取出双侧股骨头做组织病理HE染色,OPG、RANKL和β—catenin免疫组化染色,OPG及其相关因子的基因芯片分析以及c-Fos、c-Jun和β-catenin基因的实时定量PCR检测。结果基因芯片结果显示,模型组与正常对照组相比,OPG和c-Fos的表达明显降低(R>2),有统计学意义。c-Jun、RANK、RANKL、PDGF、PTH、PTHR、和β-catenin的表达改变无统计学意义(R<2)。ELISA和实时定量PCR检测结果与之相似。正常对照组的OPG和β—catenin免疫组化染色均较之模型组染色深、范围大,RANKL则相反。结论激素性股骨头坏死的发病过程中,OPG的表达下调引起骨重建过程失衡从而导致骨坏死和骨质疏松。在诸多OPG表达的调控因子中,c-Fos和c-Jun所主导的活化蛋白1通路(AP-1)途径发挥主要作用。

全文目录

中文摘要  5-6
ABSTRACT  6-7
一、前言  7-8
二、材料和方法  8-14
  (一) 实验材料  8-9
    1. 实验室  8
    2. 主要仪器  8
    3. 主要试剂  8-9
    4. 实验动物  9
  (二) 实验方法  9-13
    1. 大鼠药物用量换算  9
    2. 实验动物分组及SANFH大鼠模型制备  9
    3. 动物取材  9-10
    4. 组织病理学观察  10
    5. ELISA检测  10-11
    6. 基因芯片分析  11-12
    7. 免疫组化检测  12
    8. 实时荧光定量PCR检测  12-13
  (三) 数据统计  13-14
三、实验结果  14-17
  (一) 股骨头HE染色观察  14
  (二) ELISA检测结果  14
  (三) 基因芯片分析结果  14-15
  (四) 免疫组化检测结果  15
  (五) 实时荧光定量PCR检测结果  15-17
四、分析与讨论  17-23
  (一) 动物模型的选择  17-19
  (二) 大鼠激素性股骨头坏死模型中OPG表达的变化  19-20
    1. OPG和RANKL/RANK/OPG系统  19
    2. 糖皮质激素对OPG和RANKL/RANK/OPG系统的作用  19-20
  (三) 糖皮质激素对OPG相关因子表达的影响  20-22
    1. 活化蛋白1通路(AP-1)  20
    2. 血小板衍生生长因子(PDGF)  20-21
    3. 甲状旁腺激素(PTH)  21
    4. Wnt信号通路(Wnt Signaling)  21-22
  (四) 存在的问题  22-23
五、结论  23-24
六、参考文献  24-28
附图  28-30
致谢  30-31
附:文献综述  31-38
  参考文献  35-38

大鼠激素性股骨头坏死模型中OPG表达的变化及其机制研究

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