学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

肝素提取纯化新工艺及降解后的生物活性研究

作　者: 张丽萍
导　师: 马中苏
学　校: 吉林大学
专　业: 农业生物环境与能源工程
关键词: 肝素超声波模拟移动床提取纯化降解生物活性
分类号: TQ464
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
下　载: 586次
引　用: 3次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本文主要对肝素提取纯化新工艺及降解后的生物活性研究进行研究。在对国内外肝素提取纯化工艺及降解后的生物活性研究现状分析基础上,研究建立了以猪小肠为原料,采用超声波处理、酶解、盐析、沉淀结合的方法提取肝素,并应用模拟移动床连续色谱(SMB)进一步纯化的新工艺;优化了亚硝酸降解法制备低分子肝素及Wolfrom法修饰低分子肝素硫酸基团的工艺技术;对降解的低分子肝素及硫酸化低分子肝素进行了生物学功能试验。肝素提取纯化新工艺较传统工艺缩短了提取时间、降低了工艺运行成本、提高了产率和效率,产品活性亦有提高。

全文目录

提要  5-9
第1章绪论  9-31
  1.1 研究的背景和意义  9-11
    1.1.1 研究的背景  9
    1.1.2 研究的意义  9-11
  1.2 文献综述  11-29
    1.2.1 肝素提取技术研究进展  11-17
    1.2.2 超声波提取技术的应用进展  17-19
    1.2.3 模拟移动床分离纯化技术研究  19-23
    1.2.4 低分子肝素制备技术及生物活性研究进展  23-29
  1.3 研究的主要内容及关键技术  29-31
    1.3.1 超声波辅助提取猪小肠肝素的工艺技术研究  29
    1.3.2 模拟移动床离子交换系统分离纯化肝素的工艺条件研究  29
    1.3.3 亚硝酸降解法制备低分子肝素及多硫酸化肝素修饰技术的研究  29-30
    1.3.4 低分子肝素和多硫酸化肝素的生物活性试验  30-31
第2章超声波辅助提取猪小肠肝素的工艺技术研究  31-54
  2.1 试验材料和设备  31-32
    2.1.1 试剂和材料  31-32
    2.1.2 试验设备  32
  2.2 试验方法  32-38
    2.2.1 肝素制备技术路线  32-33
    2.2.2 肝素效价检测方法和标准曲线的绘制  33
    2.2.3 肝素浓度检测方法  33-34
    2.2.4 蛋白质含量的测定方法  34
    2.2.5 超声波处理猪小肠粘膜试验  34-36
    2.2.6 蛋白酶水解猪小肠粘膜试验  36-37
    2.2.7 沉淀剂去除蛋白质的试验  37-38
  2.3 结果与分析  38-52
    2.3.1 肝素效价标准曲线  38-39
    2.3.2 肝素浓度标准曲线  39-40
    2.3.3 蛋白质测定标准曲线  40
    2.3.4 超声波处理猪小肠粘膜的试验结果  40-45
    2.3.5 胰蛋白酶水解猪小肠粘膜的试验结果  45-50
    2.3.6 沉淀剂去除猪小肠粘膜料液中蛋白质的试验结果  50-52
  2.4 本章小结  52-54
第3章模拟移动床离子交换色谱分离纯化肝素的工艺条件研究  54-86
  3.1 试验材料和设备  55-56
    3.1.1 试验材料  55
    3.1.2 试验设备  55-56
  3.2 试验方法  56-69
    3.2.1 肝素浓度检测方法  56
    3.2.2 肝素效价检测方法  56
    3.2.3 紫外光谱分析肝素结构  56
    3.2.4 红外光谱分析肝素结构  56
    3.2.5 吸附率和解吸率的计算  56-57
    3.2.6 树脂筛选试验  57-58
    3.2.7 树脂静态吸附肝素的技术参数选择试验  58
    3.2.8 树脂解吸因素分析试验  58-59
    3.2.9 树脂动态吸附肝素的技术参数选择  59-60
    3.2.10 模拟移动床离子交换色谱分离纯化肝素的工艺条件研究  60-69
  3.3 结果与分析  69-83
    3.3.1 树脂筛选结果  69-70
    3.3.2 S5428 树脂静态吸附动力学试验结果  70-72
    3.3.3 树脂动态吸附动力学试验结果  72-75
    3.3.4 模拟移动床分离纯化肝素的工艺条件优化结果  75-82
    3.3.5 肝素样品分析结果  82-83
  3.4 肝素提取新工艺制备牛肺肝素的应用实验  83-84
  3.5 模拟移动床离子交换法与TMB 法效益比较分析  84
  3.6 本章小结  84-86
第4章亚硝酸降解法制备低分子肝素  86-108
  4.1 试验材料与设备  86-88
    4.1.1 试剂与材料  86-87
    4.1.2 试验设备  87-88
  4.2 试验方法  88-95
    4.2.1 试验技术路线  88
    4.2.2 亚硝酸法制备LMWH 的技术优化试验  88-89
    4.2.3 LMWH 分子量测定方法  89-90
    4.2.4 分子量分布的测定  90-91
    4.2.5 真空冷冻干燥  91
    4.2.6 LMWH 回收率的测定  91
    4.2.7 抗FXa 与抗FⅡa 活性的测定  91-93
    4.2.8 LMWH 结构的测定  93
    4.2.9 硫酸基含量测定及取代度（DS）测定  93-94
    4.2.10 其它指标的测定  94
    4.2.11 低分子肝素硫酸基团修饰条件试验  94-95
  4.3 结果与分析  95-106
    4.3.1 亚硝酸降解低分子肝素单因素试验结果  95-97
    4.3.2 亚硝酸降解法制备低分子肝素工艺参数的优化结果分析  97-100
    4.3.3 抗FXa 与抗FⅡa 活性的分析  100-101
    4.3.4 低分子肝素结构测定分析  101-102
    4.3.5 低分子肝素硫酸基团修饰条件的研究结果  102-106
  4.4 本章小结  106-108
第5章低分子肝素和多硫酸化肝素的生物活性试验  108-137
  5.1 试验材料与设备  110-112
    5.1.1 试剂与材料  110-111
    5.1.2 试验设备  111-112
  5.2 试验方法  112-119
    5.2.1 高脂饲料配制  112
    5.2.2 试剂的配制  112
    5.2.3 癌细胞的冻存  112-113
    5.2.4 冻存细胞的复苏  113
    5.2.5 细胞的传代培养  113
    5.2.6 细胞的计数  113
    5.2.7 低分子肝素对四种人癌细胞的抑制试验  113-116
    5.2.8 肝素类化合物降血脂试验  116-119
  5.3 结果与分析  119-136
    5.3.1 低分子量肝素对SGC-7901 细胞增殖的影响  119-120
    5.3.2 低分子肝素对SGC-7901 细胞形态的影响  120
    5.3.3 低分子肝素对SGC-7901 细胞细胞周期的影响  120-121
    5.3.4 低分子肝素对SGC-7901 细胞细胞凋亡的影响  121-122
    5.3.5 低分子量肝素对A549 细胞增殖的影响  122-123
    5.3.6 低分子肝素对A549 细胞形态的影响  123-124
    5.3.7 低分子肝素对A549 细胞细胞周期的影响  124-125
    5.3.8 低分子肝素对A549 细胞细胞凋亡的影响  125-126
    5.3.9 低分子量肝素对MCF-7 细胞增殖的影响  126-127
    5.3.10 低分子肝素对MCF-7 细胞形态的影响  127
    5.3.11 低分子肝素对MCF-7 细胞细胞周期的影响  127-128
    5.3.12 低分子肝素对MCF-7 细胞细胞凋亡的影响  128-129
    5.3.13 低分子量肝素对HCCLM3 细胞增殖的影响  129-130
    5.3.14 低分子肝素对HCCLM3 细胞形态的影响  130-131
    5.3.15 低分子肝素对HCCLM3 细胞细胞周期的影响  131-132
    5.3.16 低分子肝素对HCCLM3 细胞细胞凋亡的影响  132-133
    5.3.17 LMWH 抑制人癌四种细胞的机理分析  133
    5.3.18 饲喂高脂饲料和普通饲料的小鼠体重情况  133-134
    5.3.19 肝素类化合物对小鼠血浆各项指标的影响  134-136
  5.4 本章小结  136-137
第6章研究结论及展望  137-141
  6.1 研究结论  137-138
  6.2 研究展望  138-141
参考文献  141-152
博士期间发表的学术论文及取得的学术成果  152-153
致谢  153-154
摘要  154-157
ABSTRACT  157-159

肝素提取纯化新工艺及降解后的生物活性研究

内容摘要

全文目录

相似论文