学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

脂欣康干预动脉粥样硬化易损斑块及平滑肌细胞泡沫化的分子机制研究

作　者: 朱莹
导　师: 张文高
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 脂欣康胶囊动脉粥样硬化易损斑块平滑肌源性泡沫细胞 PPARγ 分子机制
分类号: R259
类　型: 博士论文
年　份: 2008年
下　载: 347次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的:探讨脂欣康干预载脂蛋白E基因敲除[ApoE(-/-)]小鼠动脉粥样硬化(As)易损斑块及平滑肌细胞泡沫化的分子作用机制,为脂欣康的进一步深入开发及临床应用提供科学依据;探讨脂欣康作为拟过氧化物酶体增殖因子激活受体γ(PPARγ)激动剂的可能性,发现新的中药治疗As靶点,拓宽中医药抗As的研究与应用思路。方法:通过对脂欣康初步基础研究和临床应用研究的整理分析,结合中西医研究的最新进展,对As易损斑块病机进行探讨。1.整体动物实验6周龄ApoE(-/-)小鼠100只随机分为5组(A-E),每组20只。6周龄具有相同遗传背景的C57BL/6J鼠20只,为C57BL/6J鼠对照组(F)。分组如下:A脂欣康组,B血脂康组,C洛伐他汀,D罗格列酮组,E模型组,F正常对照组。A-E各组分别给予脂欣康、血脂康、洛伐他汀、罗格列酮、生理盐水灌胃,F组给予生理盐水灌胃。连续灌胃给药后12周,腹腔麻醉后下腔静脉取血检测血脂水平(TG、TC、LDL-C、HDL-C、VLDL),酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)等炎症因子;取主动脉,用光镜、电镜观察ApoE(-/-)小鼠主动脉As病变形态,免疫组化法分别检测PPARγ、腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达。2.体外细胞实验在SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)原代培养、传代及鉴定成功的基础上,加入ox-LDL使其泡沫化,分为:A脂欣康组,B血脂康组,C洛伐他汀,D罗格列酮组,E生理盐水组,分别加入脂欣康含药血清、血脂康含药血清、洛伐他汀含药血清、罗格列酮含药血清、生理盐水含药血清,并设F组为不加含药血清的空白对照组。采用高效液相色谱检测VSMC内胆固醇及胆固醇酯含量,激光共聚焦显微镜检测培养平滑肌源性泡沫细胞内Ca2+,原位杂交检测B类清道夫受体CD36 mRNA表达。结果:1.提出了动脉粥样硬化及其易损斑块的气虚血瘀,毒损脉络病机,和益气活血解毒治则的新思路,探讨了体现这一治则的脂欣康胶囊的中医药理论基础,整理分析了脂欣康在调脂、抗As、防治急性冠脉综合征等方面的基础与临床应用研究。2.实验结果:(1)脂欣康能够调节ApoE(-/-)小鼠的血脂水平;(2)脂欣康能显著降低ApoE(-/-)小鼠血清TNF-α和IL-1β等炎症因子的水平;(3)脂欣康具有升高ApoE(-/-)小鼠主动脉的PPARγ与ABCA1的作用,与罗格列酮有相似的PPARγ激动作用,并且优于后者;(4)脂欣康具有与洛伐他汀相似的抑制平滑肌源性泡沫细胞内CD36 mRNA表达的作用,并且优于洛伐他汀;(5)脂欣康可显著降低平滑肌源性泡沫细胞内的Ca2+浓度,优于洛伐他汀及血脂康;(6)脂欣康能抑制VSMC泡沫化、抗SMC增殖、抗As斑块形成,保护主动脉的形态结构特别是超微结构,稳定斑块。结论:脂欣康能够通过PPARγ活化,从转录水平调节下游靶基因CD36、ABCA1的表达及相关炎症因子TNF-α和IL-1β等的释放,从而抑制平滑肌源性泡沫细胞形成,阻断As的进程。脂欣康有望成为中医药领域中新的、特异性较高的PPARγ激动剂,其作用机制为益气活血与解毒化浊配伍,使平滑肌细胞内蕴藏的痰浊瘀毒得以疏布排泄于外,抑制VSMC增殖和泡沫化细胞形成,起到抗As稳定易损斑块的作用。

全文目录

提要  3-5
Abstract  5-11
引言  11-13
第一部分动脉粥样硬化易损斑块的病机探讨与脂欣康的研究基础  13-40
  一、动脉粥样硬化易损斑块研究现状  13-16
    （一）急性冠脉综合征与动脉粥样硬化易损斑块  13-14
    （二）现代医学关于动脉粥样硬化易损斑块干预措施研究现状  14
    （三）动脉粥样硬化易损斑块中医、中西医结合干预研究现状  14-16
  二、毒邪致病与动脉粥样硬化炎症发病机制  16-21
    （一）动脉粥样硬化炎症发病机制  16-17
    （二）毒邪渊源  17-19
    （三）动脉粥样硬化中医病机的传统认识  19-20
    （四）毒邪致病与动脉粥样硬化易损斑块中医病机新探讨  20-21
  三、脂欣康的中医药学理论基础  21-25
    （一）动脉粥样硬化及其易损斑块的中医治则探讨  21-22
    （二）脂欣康的方药分析与特色  22-23
    （三）脂欣康组方的现代药理基础  23-25
  四、脂欣康的初步基础研究与临床应用研究  25-33
    （一）脂欣康的初步基础研究  25-29
    （二）脂欣康的临床应用研究  29-33
  五、脂欣康的深入研究与应用展望  33
  参考文献  33-40
第二部分脂欣康干预动脉粥样硬化易损斑块及平滑肌细胞泡沫化的分子机制研究  40-93
  研究之一脂欣康干预载脂蛋白E 基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块的研究  40-57
    实验一脂欣康对载脂蛋白E 基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响的病理形态学观察.  40-42
      一、材料与方法  40-41
        （一）材料  40
        （二）实验动物分组及给药方法  40-41
        （三）病理形态学观察  41
      二、结果  41-42
    实验二脂欣康对载脂蛋白E 基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响的超微结构观察  42-44
      一、材料与方法  42-43
        （一）材料  42
        （二）实验动物及分组给药方法  42-43
        （三）超微结构观察  43
      二、结果  43-44
    实验三脂欣康对载脂蛋白E 基因敲除小鼠血脂的影响  44-47
      一、材料与方法  44-45
        （一）材料  44
        （二）实验动物及分组给药方法  44
        （三）血脂测定  44-45
        （四）统计学处理  45
      二、结果  45-47
    实验四脂欣康对载脂蛋白E 基因敲除小鼠血清TNF-Α的影响  47-49
      一、材料与方法  47-48
        （一）材料  47
        （二）实验动物及分组给药方法  47
        （三） TNF-αELISA 检测  47-48
        （四）结果判定  48
        （五）统计学处理  48
      二、结果  48-49
    实验五脂欣康对载脂蛋白E 基因敲除小鼠血清IL-1Β的影响  49-51
      一、材料与方法  49-50
        （一）材料  49
        （二）实验动物及分组给药方法  49
        （三） IL-1βELISA 检测  49-50
        （四）结果判定  50
        （五）统计学处理  50
      二、结果  50-51
    实验六脂欣康对载脂蛋白E 基因敲除小鼠主动脉PPARΓ的影响  51-54
      一、材料与方法  51-53
        （一）材料  51
        （二）实验动物及分组给药方法  51
        （三） PPARγ免疫组化检测  51-53
        （四）统计学处理  53
      二、结果  53-54
    实验七脂欣康对载脂蛋白E 基因敲除小鼠主动脉ABCA1 的影响  54-57
      一、材料与方法  54-56
        （一）材料  54
        （二）实验动物及分组给药方法  54
        （三） ABCA1 免疫组化检测  54-55
        （四）统计学处理  55-56
      二、结果  56-57
  研究之二脂欣康干预SD 大鼠血管平滑肌细胞泡沫化的研究  57-70
    实验一 SD 大鼠血管平滑肌细胞的培养与观察  57-62
      一、材料与方法  57-60
        （一）材料  57-58
        （二）平滑肌细胞的培养和鉴定  58-59
        （三）平滑肌细胞的生物学特性  59-60
      二、结果  60-62
    实验二脂欣康对平滑肌源性泡沫细胞内胆固醇及胆固醇酯含量的影响  62-65
      一、材料与方法  62-65
        （一）材料  62
        （二）含药血清的制备[6,7]  62-63
        （三）泡沫细胞的制备及鉴定  63
        （四）高效液相色谱检测SMC 内胆固醇及胆固醇酯含量  63-64
        （五）统计学处理  64-65
      二、结果  65
    实验三脂欣康对平滑肌源性泡沫细胞内钙离子浓度的影响  65-67
      一、材料与方法  65-66
        （一）材料  65-66
        （二）含药学清的制备  66
        （三）细胞内Ca~(2+)浓度的测定  66
        （四）统计学处理  66
      二、结果  66-67
    实验四脂欣康对平滑肌源性泡沫细胞内 CD36mRNA 表达的影响  67-70
      一、材料与方法  67-69
        （一）材料  67
        （二）含药学清的制备  67
        （三）细胞内CD36mRNA 表达的测定  67-68
        （四）统计学处理  68-69
      二、结果  69-70
  讨论  70-85
    一、平滑肌细胞泡沫化与动脉粥样硬化  70-71
    二、动脉粥样硬化及易损斑块病理机制研究进展  71-78
      （一）动脉粥样硬化及易损斑块的病理特点  71-73
      （二）影响斑块稳定性的相关因素  73-78
    三、载脂蛋白E 基因敲除小鼠模型用于易损斑块研究的价值  78-79
    四、脂欣康干预动脉粥样硬化及易损斑块的机理探讨  79-83
      （一）调脂作用  79-80
      （二）抗炎作用  80-81
      （三）拟PPARγ激动剂作用  81
      （四）对ABCA1 的调控作用  81-82
      （五）对CD36 的调控作用  82-83
      （六）对细胞内钙离子浓度的作用  83
    五、本研究的意义  83-84
    六、本研究的主要创新点与不足  84-85
      （一）主要创新点  84-85
      （二）本研究的不足之处  85
  参考文献  85-93
结语  93-95
综述  95-102
附录  102-111
致谢  111-112
附件  112-121

脂欣康干预动脉粥样硬化易损斑块及平滑肌细胞泡沫化的分子机制研究

内容摘要

全文目录

相似论文