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酶抑制结合荧光猝灭体系的建立及其在有机磷农药检测中的应用
作 者: 王葵葵
导 师: 胡敬田;姜玮
学 校: 山东大学
专 业: 环境科学
关键词: 酶抑制作用 荧光猝灭作用 有机磷化合物 对氧磷 金纳米颗粒尺寸效应
分类号: X839.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
有机磷化合物(OPs)是一类高效、广谱杀虫剂,是目前世界上使用最多的农药品种。OPs对人畜有较高的毒害性,其中最重要的是OPs对乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制,会使有乙酰胆碱(ATCh)能受体的器官功能发生障碍,中毒严重的人畜可能因昏迷和呼吸衰竭死亡。因此,对环境样品中的OPs进行定量检测具有重要意义。目前检测OPs化合物的方法有很多,如气相色谱法、高效液相色谱法、电化学法和免疫夹心法等等。其中气相色谱法、高效液相色谱法和电化学法是最常用的OPs化合物检测方法,但其缺点是往往无法达到足够低的检测限。免疫夹心法灵敏度较高,但是相对比较复杂,需要合成对应的抗体,费时费力。近年来,酶抑制法检测有机磷化合物得到广泛的关注,并迅速得到发展和应用。本文对不同的酶抑制结合荧光猝灭体系进行了系统的研究,并将这些体系应用于对氧磷,定量检测了对氧磷的浓度。论文第一部分为绪论部分,该部分全面总结了酶抑制作用和荧光猝灭作用的原理和荧光探针的研究进展,分别重点探讨了酶抑制体系和荧光猝灭体系在目标物的分析中的应用,包括定性定量检测、作用机理等作了详细的叙述。论文第二部分对OPs抑制。AChE酶的作用和DACM-巯基荧光猝灭作用的共存体系进行了详细的研究。该体系通过OPs化合物抑制AChE酶的催化活性,使生成的DACM-巯基化合物减少,并且此过程中生成对硝基苯酚,可以使DACM-巯基的荧光强度猝灭,在不必分离OPs的情况下实现了对不同浓度的OPs的检测,并对OPs对氧磷进行了定量检测。此外,利用不同的表征方法初步证实了酶抑制作用和荧光猝灭作用的产生,对实验现象进行了合理解释。论文第三部分对OPs抑制AChE酶的作用和金纳米颗粒尺寸引起的荧光猝灭作用体系进行了详细的研究。AChE酶水解ATCh生成TCh, TCh可以自身结合生成电子作为AuCl4-的还原剂,生成产物结合在原金纳米颗粒表面,得到尺寸增大的金纳米颗粒,更多的罗丹明B吸附在增大的金纳米颗粒表面,荧光猝灭作用更明显,实现对不同浓度的对氧磷的定量检测。此外,利用不同的表征方法证实了金纳米颗粒尺寸增大效应的存在。本论文的主要创新点:一、研究酶抑制作用和荧光猝灭作用的共存体系,并结合两者的共同作用,建立起两种新的检测OPs的定量方法。二、研究酶抑制体系,建立了不必分离目标物质,高信噪比,高选择性的OPs检测方法。三、上述研究工作为开创新的有机磷检测体系,选择新型荧光探针提供了一定的理论和实践基础,在环境样品中OPs的定量检测方面具有潜在的实际应用价值。
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全文目录
中文摘要 10-12 ABSTRACT 12-14 符号与缩写 14-15 第一章 绪论 15-40 1.1 有机磷农药的残留现状 15-17 1.2 有机磷农药残留检测方法及快速检测技术的应用现状 17-20 1.2.1 色谱法 18-19 1.2.2 波谱法 19 1.2.3 酶联免疫法 19-20 1.3 酶抑制方法研究现状 20-23 1.3.1 电化学型EBS 22 1.3.2 光化学型EBS 22-23 1.4 荧光猝灭方法在分析中的应用 23-27 1.4.1 环境中重金属的检测 24-25 1.4.2 有机物分子的研究分析 25-26 1.4.3 其他生物大分子的研究 26-27 1.5 本论文的研究目的和研究内容 27-28 1.5.1 研究目的 27 1.5.2 研究内容 27-28 参考文献 28-40 第二章 基于酶抑制作用和荧光猝灭作用测定对氧磷 40-58 2.1 引言 40-42 2.2 实验部分 42-43 2.2.1 仪器装置 42 2.2.2 试剂 42 2.2.3 实验方法 42-43 2.3 结果与讨论 43-51 2.3.1 体系的荧光光谱和紫外光谱 43-45 2.3.2 DACM浓度的影响 45-46 2.3.3 pH的影响 46 2.3.4 对氧磷与AChE反应时间的影响 46-47 2.3.5 加入ATCh和DACM后孵育时间的影响 47-48 2.3.6 干扰物质的影响 48-49 2.3.7 对氧磷的定量检测 49-50 2.3.8 回收率的测定 50-51 2.4 结论 51-53 参考文献 53-58 第三章 基于酶抑制作用和金纳米颗粒尺寸效应的荧光猝灭法定测定对氧磷 58-75 3.1 引言 58-60 3.2 实验部分 60-62 3.2.1 仪器装置 60 3.2.2 试剂 60-61 3.2.3 实验方法 61-62 3.3 结果与讨论 62-70 3.3.1 胶体金体系的组成和荧光性质 62-63 3.3.2 加样顺序的影响 63-64 3.3.3 RB浓度对荧光体系的影响 64-65 3.3.4 HAuCl_4浓度对荧光体系的影响 65-66 3.3.5 孵育时间对荧光体系的影响 66-67 3.3.6 干扰物质的影响 67-68 3.3.7 定量检测对氧磷 68-69 3.3.8 回收率的测定 69-70 3.4 结论 70-71 参考文献 71-75 第四章 工作结论与展望 75-77 4.1 结论 75-76 4.2 应用前景 76-77 致谢 77-78 硕士期间发表论文 78-79 学位论文评阅及答辩情况表 79
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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境质量评价与环境监测 > 环境监测 > 农用化学品监测
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