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转“全鱼”元件溶菌酶基因大菱鲆的初步研究

作　者: 纪伟
导　师: 张培军
学　校: 中国科学院研究生院（海洋研究所）
专　业: 海洋生物学
关键词: 抗冻蛋白基因启动子 c型溶菌酶基因大菱鲆（Scophthalmus maximus）电脉冲精子介导法
分类号: S961.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

本实验构建了“全鱼” 元件溶菌酶基因重组质粒opAFP-ly，利用电脉冲精子载体法将该外源DNA片段导入到大菱鲆（Scophthalmus maximus）受精卵内，获得500尾的原代转基因大菱鲆仔鱼。采用RT-PCR的方法，从牙鲆外周血单个核细胞中分离出c型溶菌酶基因，克隆到克隆载体PMD-T中，并将其基因片段亚克隆到表达载体opAFP-V，与抗冻蛋白基因启动子重组，从而构建了“全鱼” 元件溶菌酶基因重组质粒opAFP-ly。采用了单因子实验和正交实验相结合的方法，综合考虑原肠胚成活率S（%）、孵化率H（%）和外源DNA的导入率T（%），确定了导入率较高的最适导入条件：脉冲电压为400 V/cm,脉冲次数为5，脉冲宽度为25 ms,外源DNA浓度为50 mg/L。首先，分别对脉冲电压、脉冲次数和外源DNA的浓度进行单因子实验，得到各因素的适宜水平范围。然后，依此适宜水平范围选取3因素的3个水平，采用正交方法进行正交实验，获得3因素水平组合的最佳值，即最适导入条件。利用最适导入条件，实现基因元件大规模转移。采用PCR技术对一月龄的原代转基因大菱鲆仔鱼的染色体DNA进行分析，实验结果表明外源基因的阳性检出率可达28%。本实验初步建立了利用电脉冲精子载体法实现基因转移的操作方法，为以后经济鱼类基因工程育种在生产实践中的应用奠定了基础。

全文目录

目录  3-4
摘要  4-5
ABSTRACT  5-6
第一章转基因技术研究的进展与展望  6-25
  1.1 基因转移在生物技术中的地位与作用  6-8
  1.2 转基因技术的基本原理和应用  8-12
  1.3 常见的转基因技术  12-18
  1.4 转基因鱼的研究进展  18-21
  1.5 转基因鱼研究所存在的问题及解决对策  21-23
  1.6 转基因技术在增加鱼类抗逆性方面的研究进展  23-25
第二章电脉冲精子载体法将外源基因导入大菱鲆的初步研究  25-44
  2.1 材料与方法  25-29
  2.2 结果  29-39
  2.3 讨论  39-44
结论  44-45
参考文献  45-49
已发表文章  49-50
致谢  50

转“全鱼”元件溶菌酶基因大菱鲆的初步研究

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