学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

猪肉弓形虫检验方法的研究

作　者: 王小波
导　师: 许益民
学　校: 扬州大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 弓形虫 DT IHA HC 间接ELISA PCR 猪肉检测比较
分类号: S854.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 226次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本研究首先建立猪弓形虫抗体间接ELISA 检测方法。在试验中比较了三种纯化弓形虫速殖子的方法。试验结果显示，植物血凝素(PHA-P)法虫体回收率和白细胞清除率均超过98％，只有1.5％的白细胞未被清除，大大减少了ELISA抗原所致的非特异性反应，所以本研究应用植物血凝素法纯化弓形虫速殖子。通过对弓形虫速殖子纯化后经超声波裂解的可溶性蛋白抗原进行包被，建立间接ELISA方法检测猪弓形虫IgG抗体。其次建立双重PCR检测方法，据弓形虫基因组B1基因与529bp的重复基因片断设计并合成两对引物，建立快速、准确、灵敏、稳定的双重PCR检测猪弓形虫的方法。灵敏度试验结果可检测到20fg弓形虫基因组DNA水平，结果表明此双重PCR方法灵敏度高；特异性试验检测包括鸡柔嫩艾美耳球虫、牛肉孢子虫、猪肉孢子虫、旋毛虫等16种病原微生物，结果均为阴性，结果表明此双重PCR方法特异性强。将采自兽医院门诊及肉联厂、屠宰场的511份猪血清样品分别用建立的ELISA和IHA Kit试剂盒进行平行检测。IHA Kit初步检测兽医院门诊95份病猪及扬州屠宰场151份屠猪血清样品，阳性及可疑的血清样品共计49份。用DT、IHA和间接ELISA平行检测此49份血清样品。结果49份血清样品中，DT检出10份阳性，39份阴性；DT检出10份阳性样品中，IHA检出7份阳性；间接ELISA检出9份阳性；同时用免疫过氧化物酶染色方法和PCR方法对49份血清样品对应的组织样品进行检测，结果免疫过氧化物酶染色法检出5份阳性，PCR检出7份阳性。DT检出39份阴性样品中IHA检测出一份阳性；间接ELISA检测出3份阳性；免疫过氧化物酶染色、PCR检测全部为阴性。与DT相比，IHA试验的敏感性、特异性、符合率和Youden指数分别为76.92％、97.5％、91.85％和0.744；间接ELISA的敏感性、特异性、符合率和Youden指数分别为90.9％、92.85％、91.85％和0.838；免疫过氧化物酶染色法的敏感性、特异性、符合率和Youden指数分别为66.7％，、100％、89.80％和0.678；PCR的敏感性、特异性、符合率和Youden指数分别为76.9％、100％、93.88％和0.77。试验结果表明，IHA、IHC、PCR法特异性强，但敏感性较低：间接ELISA的敏感性高、特异性强，由Youden指数判断此间接ELISA具有诊断价值，而且间接ELISA的阳性率高于其它方法，可以成为一种有用的弓形虫病诊断方法。根据试验结果，初步建立并优化的猪弓形虫检测程序为：首先用IHA、ELISA对待检样品进行检测以快速筛选出大量的阴性样品，而后用免疫过氧化物酶染色法和PCR方法进一步进行检测。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-6
目录  6-7
符号说明  7-8
综述: 猪弓形虫病诊断方法的研究进展  8-15
论文正文  15-50
  试验一猪弓形虫间接红细胞凝集试验  15-19
    材料与方法  15-16
    结果  16-17
    讨论  17-19
  试验二猪弓形虫染色试验  19-23
    材料与方法  19-20
    结果  20-21
    讨论  21-23
  试验三猪弓形虫辣根过氧化物酶染色试验  23-35
    材料与方法  23-25
    结果  25-26
    讨论  26-35
  试验四猪弓形虫抗体间接ELISA 检测方法的建立与应用  35-41
    材料与方法  35-37
    结果  37-39
    讨论  39-41
  试验五猪弓形虫双重PCR检测方法的建立与应用  41-48
    材料与方法  41-43
    结果  43-46
    讨论  46-48
  试验六猪弓形虫不同检测方法的比较  48-50
    材料与方法  48
    结果  48-49
    讨论  49-50
小结  50-51
参考文献  51-57
附录  57-60
致谢  60-61
攻读学位期间公开发表的论文  61

猪肉弓形虫检验方法的研究

内容摘要

全文目录

相似论文