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茶黄素酶促氧化制备技术的研究

作 者: 谷记平
导 师: 刘仲华;黄建安
学 校: 湖南农业大学
专 业: 茶学
关键词: 茶黄素 儿茶素 生物制备 酶促氧化 单液相 双液相
分类号: TQ28
类 型: 硕士论文
年 份: 2004年
下 载: 283次
引 用: 9次
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内容摘要


茶黄素(Theaflavins,TFs)是目前茶叶深度开发领域中研究的热点成分,在天然药物、功能食品、日用化工、功能饮料等领域有着广泛的应用前景。但是,红茶中茶黄素的含量非常低,从红茶中提取制备茶黄素,分离纯化难度大且得率低,工业化生产成本高,这严重影响着茶黄素产业化开发的进程及茶黄素的广泛应用。本文在前人研究的基础上,通过摸索最佳反应条件,选用不同的酶源和底物,采用生物酶促氧化的方法制取含量较高的茶黄素粗品,旨在为茶黄素的提取分离与纯化提供高含量的基料。本研究首次使用的苹果和梨子作为多酚氧化酶(PPO)的酶源来制取茶黄素,取得了很好的效果,为茶黄素的酶促氧化制备提供了一条新的高效途径。 反应条件的优化研究表明,在本试验的反应体积下,茶黄素酶促合成的最佳条件为:温度为30℃,反应体系的最佳pH值为4.8,底物浓度为0.9g/100ml,酶浓度为28g/100ml(以鲜叶重量计),通氧量为0.41/min。温度和pH值是反应体系中两个重要的影响因素(P<0.05)。 PPO酶源筛选研究表明,在供试的酶源中,对茶黄素的形成与积累的效果依次为:梨子>茶叶>苹果>微生物(1号,多孔菌,Polyporus;2号,毛栓菌,Trametes trigii;3号和4号是作者分离纯化得到,属于尚未鉴定的霉菌类)。利用梨子PPO制取茶黄素,其含量高达45.727%,制率也高达41.11%。而在供试的茶鲜叶中,苹云较好,槠叶齐次之,在以苹云冷冻叶为酶源制取的茶黄素含量达33.737%,制率达42.22%,非冷冻叶的茶黄素达14.5%,制率为72.22%。在自选微生物菌种中,自选4号>3号>2号和1号。 不同底物的筛选试验研究表明,在本试验条件下,高EGC的儿茶素氧化效果最好。小叶种儿茶素比大叶种儿茶素的效果要好。 双液相试验研究表明,不同的酶源对双液相体系的试验效果不同,就茶鲜叶而言,采用双液相效果明显比单液相显著。在双液相系统中,非冷冻叶制取茶黄素其总含量达49.308%,制率为59.44%。而对苹果和梨子而言,单液相比双液相要效果好些。 不同缓冲液试验研究表明,在利用茶鲜叶制取茶黄素时,从TFs含量来看,乙酸—乙酸钠缓冲液要比柠檬酸一磷酸氢二钠缓冲液好些,但从得率来看,前者比后者要低。

全文目录


前言  8-14
一. 材料与方法  14-15
  1 试验材料  14
  2 主要仪器、设备  14
  3 主要试剂  14-15
二、 检测方法  15-16
三、 研究内容  16-22
四、 结果与分析  22-45
  1 发酵条件的优化试验  22-27
    1.1 pH值对茶黄素形成的影响  22-23
    1.2 温度对茶黄素形成的影响  23-24
    1.3 底物浓度对茶黄素形成响  24-26
    1.4 酶液浓度对茶黄素形成的影响  26
    1.5 外源酶促氧化的最佳反应时间(粗酶液)  26-27
  2 最佳反应条件的确定  27-30
    2.1 正交试验结果  27-30
    2.2 正交试验的方差分析  30
  3 反应时间对茶黄素形成的影响(非提酶)  30-33
  4 不同反应底物(儿茶素)对茶黄素形成的影响  33-35
  5 氧气对茶黄素形成的影响  35-37
  6 不同酶源的筛选  37-40
  7 冷冻鲜叶对茶黄素形成的影响  40-43
    7.1 单相试验研究  40-41
    7.2 双相试验研究  41-43
  8 缓冲液对茶黄素合成的影响  43-45
五、 讨论  45-50
六、 结论  50-51
七、 参考文献  51-55
八、 缩略词及中英文对照  55-56
九、 致谢  56-57
十、 作者简介  57

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 基本有机化学工业 > 天然有机化合物的生产
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