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生物转基因成分检测方法的研究

作　者: 乔艳红
导　师: 潘家荣；张维
学　校: 中国农业科学院
专　业: 生物物理学
关键词: 转基因检测免疫分析
分类号: Q78-3
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

转基因作物由于具有抗虫害杂草等优良的品质，目前在很多国家都已大规模商品化生产。但随着对转基因食品安全性认识的不断深入，各国在积极发展转基因技术的同时，加强了对转基因产品的监控和管理。我国政府和世界很多国家都采用了对转基因作物进行标识的制度，因此积极开发快速检测转基因成分的试剂盒具有重大的实际意义。本研究旨在研究形成最终产品一方便快捷的转基因成分检测试剂盒过程的关键技术和科学问题。根据转基因抗草甘膦作物中普遍存在的保守序列，设计合成一对引物，对转基因抗草甘膦大豆进行PCR扩增。将获得的片段制作成探针，并对该探针在杂交时的结合比率进行初步研究，为其在检测试剂盒中的应用奠定基础。通过磁性微粒连接Bt Cry 1Ac晶体蛋白抗体，研制成Bt Cry1Ac晶体蛋白放射免疫检测试剂盒，不仅比常规检测缩短了反应时间，也简化了操作步骤，具有定量、快速、灵敏的特点。建立了两株分泌抗Bt Cry 1Ac晶体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其染色体数平均为96，分泌抗体稳定。抗体亚型为IgG₁，对Cry1Ac的灵敏度是1.0ng／ml，与Cry1Ab的交叉反应率为0.25％，与Cry2A的交叉反应小于0.1％。应用一株细胞制备腹水，腹水抗体中蛋白含量大约为4—6mg／ml，腹水抗体亲合力常数为1.0928×10¹⁰l／mol。两株细胞株分泌抗体效价较高，为进一步开发出试纸条检测卡奠定了基础。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
第一章引言  9-16
  1.1 转基因作物发展概况  9-11
  1.2 国内外研究现状  11-15
  1.3 本研究的目的和意义  15-16
第二章抗草苷膦基因的检测  16-28
  2.1 材料  16-17
  2.2 实验方法  17-23
  2.3 结果  23-27
  2.4 讨论  27-28
第三章 Bt CrylAc蛋白的放射免疫试剂盒研制  28-36
  3.1 材料  28
  3.2 实验方法  28-33
  3.3 实验结果  33-35
  3.4 讨论  35-36
第四章 Bt CrylAc蛋白单克隆抗体细胞株的建立  36-56
  4.1 材料  36-39
  4.2 实验方法  39-47
  4.3 实验结果  47-55
  4.4 讨论  55-56
第五章结论  56-57
参考文献  57-61
致谢  61-62
作者简历  62

生物转基因成分检测方法的研究

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