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膳食诱导肥胖及肥胖抵抗大鼠瘦素水平和神经肽Y mRNA的表达研究

作　者: 翟玲玲
导　师: 姚兴家
学　校: 中国医科大学
专　业: 儿少卫生与妇幼保健学
关键词: 膳食诱导肥胖膳食诱导肥胖抵抗瘦素神经肽Y
分类号: R589.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

前言肥胖被视为一种以身体脂肪含量过多为主要特征的、原因复杂的、能够合并多种疾患的慢性病，它与心脑血管疾病、高血压、糖尿病、脂代谢紊乱等密切相关。随着我国社会经济的发展和人民生活水平的提高，肥胖已成为我国二十一世纪最常见的健康问题之一。肥胖的研究已经受到各国学者的普遍关注。1994年底，首次从小鼠和人体内发现并克隆出肥胖基因(ob基因)以来，世界各国掀起了ob基因研究的热潮，肥胖研究进入了分子生物学时代。由于肥胖的病因复杂，以人为对象研究肥胖发生的生物学机制十分困难，采用动物模型可得到从人类无法获得的信息。1983年，Levin等人发现喂高脂饲料的同一批大鼠，部分发生肥胖，部分不发生肥胖。1994年，Lauterio等人发展了此模型，高脂饮食时，根据体重增加程度不同，处于上游亚群的称为膳食诱导肥胖(diet-induced obesity，DIO)，处于下游亚群的称为膳食诱导肥胖抵抗(diet-induced obesity resistant，DIO-R)，介于两者之间弃之。Lauterio等人研究膳食诱导肥胖的SD大鼠，高脂饲料喂养后，DIO大鼠与DIO-R大鼠血清瘦素(leptin)水平都升高，但DIO大鼠血清瘦素水平比DIO-R大鼠高。Watson等研究认为神经肽Y mRNA(NPY mRNA)减少在肥胖抵抗中起到一定作用。DIO和DIO-R大鼠两者有何区别，下丘脑NPYmRNA和血清瘦素水平如何变化及两者与肥胖抵抗的关系如何，本文着重探讨这几个问题，为今后揭示肥胖抵抗的机制，提供理论依据，并为肥胖研究提供新的思路。目的 1．研究DIO和DIO-R大鼠在给予高脂饮食早期和晚期的体脂含量，血清瘦素、胰岛素水平的变化。 2．探讨DIO和DIO-R大鼠下丘脑弓状核NPY mRNA的表达。3.探讨瘦素与神经肤Y mRNA关系。4.探讨瘦素、神经肤Y mRNA与肥胖抵抗关系。实验材料和方法一、实验材料 1.实验动物:雄性健康Wistar大鼠共52只，体重200士209，中国医科大学实验动物中心提供。 2.瘦素、胰岛素放射免疫试剂盒，购于中国人民解放军总医院放免研究所。 3.NPY mRNA检测试剂:生物素标记的NPY DNA单链寡核昔酸探针购于TaKaRa公司，原位杂交试剂盒购于美国Invitrogen公司。 4.饲料配方和主要营养成分: 基础饲料配方(1009):豆粕259、黄豆59、玉米309、酵母2.59、鼓子109、鱼粉109、骨粉2.59、高粱59、标准粉8.59、豆油19、盐0.59。高脂饲料配方(l 009):基础饲料449、鸡蛋209、奶粉1 59、猪油巧g、鲜黄豆芽59、鱼肝油19。二、实验方法 1.动物的分组与饲养动物适应性饲养lw后，将动物随机分为2组:第一组为24只，随机分对照组6只，实验组18只，实验Zw末处死;第二组28只，随机分对照组7只，实验组21只，实验12w末处死。对照组给予基础饲料，实验组给予高脂饲料。动物室温度22士3℃，相对湿度45%一5%，自由饮水摄食，体重每周记录一次。 2.标本的采集与处理 2.1血清采集:所有大鼠分别在正式实验开始后Zw末和12w末，禁食12h，于下腔静脉取血5耐。采集的血样在室温下静置Zh后，以3000rpm离心20而n，分离血清，密封，于一70℃深冻冰箱中保存，待测。 2.2脂肪垫取材:剖开腹腔，分离肾周、附翠、肠系膜脂肪垫，称重并冷冻保存(一O℃)。 2.3脑组织取材:取血后，大鼠断头处死，迅速取出下丘脑组织，处理后恒温冷冻切片，每一动物下丘脑弓状核平面取4张切片，片厚13卜m，切片自然干燥后于一O℃深冻冰箱保存，待测。 3.DIO及DIO一R大鼠的判定实验组高脂饲料喂养Zw、12w后，按体重由高至低排序，体重位于上游的前1乃大鼠判定为DIO大鼠，体重位于下游的后1/3大鼠为DIO一R大鼠，介于两者之间的弃之。 4.指标的检测 4.1血清瘦素水平测定:平衡法，按瘦素放射免疫分析试剂盒中的使用说明进行操作。 4.2血清胰岛素水平测定:采用放射免疫分析方法，按胰岛素放射免疫分析试剂盒中的使用说明进行操作。 4.3下丘脑弓状核NPY mRNA测定:原位杂交方法。结果判定采用图象分析系统(MetaMo印h Im娜即stemv4·6)。 5.统计分析采用SPSS统计软件进行统计学分析，实验数据用又*s表示，各指标的比较采用单因素方差分析，随后采用LSD法进行两两比较。相关性分析采用Pearson相关分析。实验结果 1.实验期内，DIO组、DIO一R组和对照组大鼠体重的变化实验前三组大鼠体重并无明显差异(P>0 .05)，但到实验Zw末，喂高脂饲料的大鼠体重开始分化，DIO组大鼠体重显著高于DIO一R组和对照组大鼠(P<0.01);到实验12w结束时，DIO组大鼠体重仍显著高于DIO一R组和对照组大鼠(P<0.01)。DIO一R组与对照组大鼠相比体重始终没有显著性差异(p>0.05)。 2 .DIO组、DIO一R组和对照组大鼠腹部脂肪储存状况的比较实验Zw末，Dlo组大鼠附攀部脂肪、肾周脂肪、肠系膜脂肪、总脂肪及单位体重脂肪(单位体重脂肪(留kg)二总脂肪垫重量/体重)显著高于DIO-R组和对照组大鼠(P<0.01);DIO一R组大鼠各脂肪垫水平同对照组大鼠相比无差别(

全文目录

一、中文摘要  3-10
二、英文摘要  10-17
三、英文缩略语  17-18
四、论文主体  18-33
  1 前言  18-19
  2 实验材料与方法  19-22
  3 实验结果(附表附图)  22-29
  4 讨论  29-32
  5 结论  32-33
五、本研究新见解  33-34
六、参考文献  34-37
七、致谢  37-38
八、综述  38-48
九、个人简介  48-49
十、在学期间发表论文、获奖等题目  49

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