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乙型肝炎病毒标志物时间分辨荧光免疫分析法的研究

作　者: 沈健
导　师: 林德球
学　校: 华南师范大学
专　业: 植物学
关键词: 标记免疫分析 时间分辨荧光免疫分析 夹心法 中和抑制法 乙型肝炎病毒标志物
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 228次
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内容摘要


标记免疫分析技术是一大类高灵敏度、高特异性检测技术的总称，因具有许多独特的优点，广泛应用于基础医学和临床各领域。时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是当前标记免疫分析研究应用领域的热点之一，具有高灵敏性和高特异性，用于生物分子的超微量检测。乙型病毒性肝炎(简称乙型肝炎)是由乙型肝炎病毒(简称乙肝病毒)引起的肝脏炎性损害，是我国当前流行最广泛、危害最严重的一种传染病。定量检测乙型肝炎病毒血清学标志物的免疫诊断方法是预防和治疗乙型肝炎的前提，同时也能动态观测和监视病情。我们应用TRFIA建立了乙型肝炎病毒五项血清学标志物的时间分辨荧光免疫分析法，经初步的临床应用，得到较为满意的结果。 通过实验研究，以Eu-DTTA为示踪物，得到如下结论： 1．以夹心法建立了乙型肝炎病毒表面抗原时间分辨免疫荧光分析法(HBsAg-TRFIA)、乙型肝炎病毒表面抗体时间分辨免疫荧光分析法(HBsAb-TRFIA)、乙型肝炎病毒e抗原时间分辨免疫荧光分析法(HBeAg-TRFIA)，所建立的标准曲线分析范围分别为0-300ng／ml、0-1280mIU／ml、0-16NCU／ml，分析灵敏度为0.05ng／ml、0.44mIU／ml、0.03NCU／ml。检测参考标准品的批内变异系数均小于10％，与IRMA同时定量检测多份血清样本，相关系数高达95％。 2．以中和抑制法建立了乙型肝炎病毒e抗体时间分辨荧光免疫分析法(HBeAb-TRFIA)和乙型肝炎病毒核心抗体时间分辨荧光免疫分析法(HBcAb-TRFIA)，标准曲线分析范围分别为0-16NCU／ml和0-8NCU／ml。检测参考标准品的批内变异系数均小于10％，与IRMA同时定量检测多份血清样品，灵敏度分别为92.8％和93.3％。 总之，我们利用Eu-DTTA为标记物建立的乙型肝炎病毒五项血清学标志物时间分辨荧光免疫分析法分析范围宽，灵敏度高，操作简便，具有优越的定量检测能力，十分适合临床推广应用。

全文目录


中文摘要  7-8
英文摘要  8-9
第一章 绪论  9-23
  1.1 课题研究背景  9-11
  1.2 时间分辨荧光法和时间分辨荧光免疫分析技术  11-18
  1.3 时间分辨荧光免疫分析法的应用  18-19
  1.4 诊断乙型病毒性肝炎的重要意义  19-22
  1.5 本论文的研究内容  22
  1.6 小结  22-23
第二章 乙型肝炎病毒表面抗原时间分辨免疫荧光分析法的建立(双抗体夹心法)  23-48
  2.1 材料与方法  23-28
    2.1.1 主要仪器设备  23
    2.1.2 主要材料  23-24
    2.1.3 溶液配置  24
    2.1.4 实验方法:  24-28
  2.2 结果与分析  28-45
    2.2.1 包被原料的鉴定  28-30
    2.2.2 豚抗-HBs-IgG的鉴定  30-31
    2.2.3 分析条件的优化  31-39
    2.2.4 反应温度、时间的确定  39-40
    2.2.5 临床参考值的确定  40-42
    2.2.6 抗干扰检测试验结果  42
    2.2.7 方法学评价  42-44
    2.2.8 稳定性试验  44
    2.2.9 TRFIA和IRMA的相关性比较  44-45
  2.3 讨论  45-48
第三章 乙型肝炎病毒表面抗体时间分辨免疫荧光分析法的建立(双抗原夹心法)  48-52
  3.1 材料和方法  48-49
  3.2 结果与分析  49-52
    3.2.1 方法学评价  49-50
    3.2.2 热稳定性实验  50-51
    3.2.3 相关性比较  51-52
第四章 乙型肝炎病毒e抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立(中和抑制法)  52-61
  4.1 材料与方法  52-53
  4.2 结果与分析  53-61
    4.2.1 包被、标记用的抗-HBe-IgG的鉴定  53-56
    4.2.2 分析方法优化实验  56-58
    4.2.3 方法学评价  58-59
    4.2.4 热稳定性实验  59-60
    4.2.5 两种方法结果比较  60-61
第五章 结论  61-62
致谢  62-63
参考文献  63-69
攻读学位期间发表论文  69-70

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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