学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

纳豆激酶分离纯化与鉴定

作　者: 李炳锦
导　师: 李水林；崔京浩
学　校: 延边大学
专　业: 药剂学
关键词: 纳豆激酶 Butyl-Toyopearl柱层析纤维蛋白平板法试管法 SDS-PAGE电泳
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 299次
引　用: 4次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本实验通过纳豆粗提物的分离纯化，提高纳豆激酶的溶栓活性，为抗栓药物制剂的开发提供科学的依据。采用Butyl-Toyopearl疏水柱层析从纳豆粗提物中纯化纳豆激酶，用试管法确定和收集馏分中的活力部分，纤维蛋白平板法测定馏分中的活力，以蚓激酶溶圈面积和活力单位的相互关系，计算纳豆激酶的纤溶活力。并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检验分离纯化的效果。根据低分子量标准蛋白的相对迁移距离和分子量的相互关系，计算分离产物的分子量。通过考察纳豆激酶粗提物在不同温度和湿度条件下的稳定性，确定保存条件。以外观和纤溶活力为指标，观察纳豆粗提物的稳定性。实验结果表明从106～158号管收集液具有较强的纤溶活性，SDS-PAGE电泳中观察到两条明显的蛋白谱带，分子量分别为19275和27101。分离纯化部分在高效液相图谱中有两组分存在。纯化倍数为50倍，活性回收率为75.57％。纳豆粗提物的初步稳定性实验结果表明，其活力和外观在40℃和60℃保存条件下发生显著变化，而4℃条件下没有显著变化；纳豆粗提物在不同湿度条件下均具有较强吸湿性。纳豆粗提物经过分离与纯化，纤溶活性明显增强，纳豆激酶的分子量与文献报道基本一致。纳豆粗提物对温度和湿度稳定性较差。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-8
前言  8-10
实验部分  10-28
  1 材料与仪器  10-11
    1.1 材料  10
    1.2 仪器  10-11
  2 实验方法  11-19
    2.1 纳豆激酶的分离纯化  11-12
      2.1.1 纳豆粗提物的处理  11
      2.1.2 柱层析分离纳豆激酶  11-12
    2.2 纳豆激酶的活力测定  12-14
      2.2.1 试管法  12
      2.2.2 纤维蛋白平板法  12-14
    2.3 纳豆激酶的活性部分的透析  14
      2.3.1 透析膜的处理  14
      2.3.2 透析  14
      2.3.3 冷冻干燥  14
    2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳  14-17
      2.4.1 储备液配制  14-15
      2.4.2 凝胶的制备  15
      2.4.3 灌胶  15-16
      2.4.4 加样  16
      2.4.5 SDS-PAGE电泳  16-17
      2.4.6 SDS聚丙烯酰胺凝胶染色  17
    2.5 活性收集液的高效液相色谱分析  17
    2.6 收集液中的SOD活力测定  17-18
    2.7 纳豆激酶的初步稳定性实验  18-19
      2.7.1 温度稳定性实验  18
      2.7.2 高湿实验  18-19
  3 结果与讨论  19-26
    3.1 柱层析收集液的紫外吸收  19
    3.2 柱层析收集液的活力测定  19-20
      3.2.1 试管法测定活性部分  19
      3.2.2 纤维蛋白平板法测定活性部分  19-20
    3.3 SDS-PAGE电泳  20
    3.4 活性收集液的高效液相色谱分析  20
    3.5 SOD对纳豆激酶的影响  20-25
    3.6 纳豆激酶的初步稳定性实验  25-26
      3.6.1 温度稳定性实验  25-26
      3.6.2 高湿实验  26
  4 结论  26-27
  参考文献  27-28
致谢  28-29
综述  29-44

纳豆激酶分离纯化与鉴定

内容摘要

全文目录

相似论文